强阳离子型超高交联树脂的合成及其在痛风生物标志物分析中的应用

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固相萃取技术(Solid Phase Extraction,SPE)因其具有简单高效、环境友好、结果稳定等优点,已逐渐取代液-液萃取技术,在环境、食品、生命科学等领域复杂样品基质的前处理中得到了广泛的应用。本论文合成了一种强阳离子型超高交联树脂固相萃取剂,对该固相萃取剂的选择性吸附性能进行研究,并应用于人体血清中碱性嘌呤类物质的分析。  本课题首先选用对氯甲基苯乙烯(VBC)和二乙烯基苯(DVB)为反应单体,无水乙腈为反应溶剂,在引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)的作用下,通过非水沉淀聚合方法,合成出低交联度聚合物母体微粒(PP);再以三氯化铁为催化剂合成出超高交联聚合物微粒(HXLPP);最后使用浓硫酸作为磺化试剂对树脂进行磺化,得到了磺酸基修饰的、具有阳离子交换作用的超高交联树脂(HXLPP-SCX)。采用扫描电镜分析、比表面积分析、红外光谱分析和离子交换容量实验对所合成的HXLPP-SCX进行了表征。结果表明,所合成的树脂是单分散的、粒径为2~6μm、孔径为2.1nm、比表面积为801m2/g、离子交换容量(IEC)为2.22meq/g的微球。将该树脂装填至固相萃取空柱中,选取具有不同pKa值的马尿酸、尿酸、黄嘌呤、次黄嘌呤和肌苷作为分析对象,结合高效液相法(HPLC),考察了HXLPP-SCX对不同pKa值的物质的选择性吸附性能。实验结果表明,HXLPP-SCX对次黄嘌呤、黄嘌呤和肌苷具有特定的选择性吸附。  最后,建立了人体血清中次黄嘌呤、黄嘌呤和肌苷的SPE-HPLC-DAD测定方法。实验结果表明,HXLPP-SCX能够从复杂的血清中选择性吸附这三种物质,并且能够有效除去血清中大部分的基质干扰。次黄嘌呤在0.05110~25.55μg/mL,黄嘌呤在0.02078~10.39μg/mL,肌苷在0.1026~10.26μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(R=0.9999),检出限(LOD)分别为4、6和18ng/mL,定量限(LOQ)分别为14、20和60ng/mL。加标回收率大于83.1%,RSD小于4.7%。方法日内精密度的RSD值小于4.9%,日间精密度的RSD值小于6.6%。将该法应用于健康人(n=10)、尿酸值正常痛风病人(n=12)和高尿酸值痛风病人(n=14)血清的测定,统计学研究结果表明,两类病人血清中的次黄嘌呤、黄嘌呤和肌苷的含量都显著高于正常人血清中三种物质的含量(P<0.01)。由此,次黄嘌呤、黄嘌呤和肌苷可考虑在临床早期诊断中作为区别痛风病人与正常人的潜在生物标志物。
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