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传染性法氏囊病(infectious bursal disease, IBD)是由传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus, IBDV)引起的一种急性、高度接触性疾病,除了直接导致临床发病之外,还可引起感染鸡的免疫抑制,使机体对其他病原体的易感性增加,继发感染其他病原,给养殖业造成了巨大的经济损失。间接ELISA是目前检测IBDV抗体方法中应用最广泛的血清学方法,具有特异性强和敏感性高的特点,且易操作、设备简单。本课题使用原核表达系统表达了IBDV的主要结构基因,并以VP2.VP1和VP2-VP1三个重组蛋白作为包被抗原建立了相应的间接ELISA方法,期望为生产上IBDV抗体的检测、基因工程疫苗的研发提供一种可靠的检测手段。首先利用PCR技术扩增了IBDV分离株NN1172的VP2和VP1基因,预测并筛选了VP2和VPl基因中抗原性、表位可能性和亲水性较好的重要区段,通过同尾酶法获得VP2-VP1串联基因；然后把3个基因的扩增产物分别连接到原核表达载体pET-32a,构建了ΔVP2-pET、ΔVP1-pET和ΔVP2-VPl-pET三个重组体,测序验证后把重组质粒转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导优化表达,表达产物经SDS-PAGE分析,证实得到分子量分别为69kDa、114kDa和63 kDa的VP2、VP1和VP2-VP1重组蛋白；经粗纯化及Ni-NTA亲和层析纯化后获得纯度较高的重组蛋白; Western blotting分析表明,VP2、VP1、和VP2-VP1重组蛋白均可与IBDV的特异性抗体发生反应,说明重组蛋白具有良好的反应原性。以纯化的VP2、VP1和VP2-VP1重组蛋白作为包被抗原,建立了相应的间接ELISA抗体检测试剂盒即VP2-ELISA、VP1-ELISA和VP2-VP1-ELISA。分别检测IBV、ReoV、ALV和NDV阳性血清,结果均为阴性,表明建立的间接ELISA具有高度的特异性；进行重复性试验,批内变异系数在2.2%-6.9%之间,批间变异系数在2.8%～14%之间,表明建立的方法具有良好的重复性；应用建立的间接ELISA检测分别免疫了IBD灭活疫苗、IBD基因工程疫苗和IBD弱毒疫苗的商业鸡场的免疫血清共570份,结果能显示疫苗免疫后机体抗体水平的变化趋势；用建立的间接ELISA以及商品试剂盒A、B平行检测OD450在间接ELISA临界值附近的184份血清样品,结果显示,与商品试剂盒A相比,VP2-ELISA的相对敏感性、相对特异性、符合率分别为91.5%、93.3%、92.4%,VP1-ELISA的分别为86.2%、91.1%、88.6%, VP2-VP1-ELISA的分别为89.4%、92.2%、90.8%。与商品试剂盒B相比,VP2-ELISA的相对敏感性、相对特异性、符合率分别为92.6%、95.5%、94%,VP1-ELISA的分别为87.3%、93.2%、90.2%,VP2-VP1-ELISA的分别为90.5%、94.3%、92.3%。本课题的研究结果表明,应用重组表达的IBDV主要结构蛋白研发的间接ELISA抗体检测试剂盒,具有良好的重复性、敏感性和特异性并与市售的两个商品试剂盒均具有很好的检测结果符合率,可应用于IBDV抗体的检测。