狗蚁草抗肝纤维化活性部位的筛选及其作用机制研究

来源 :广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hhz20091
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目的:筛选狗蚁草抗肝纤维化活性部位并研究其抗肝纤维化的机制。  方法:采用石油醚、乙酸乙酯、氯仿、正丁醇、水、95%乙醇等溶剂提取,制备狗蚁草不同极性提取部位的小鼠含药血清,通过MTT法检测狗蚁草各提取物的小鼠含药血清对肝星状细胞(HepaticStellate T6 Cells,HSC-T6)细胞的增值作用,筛选出狗蚊草抗肝纤维化活性部位。  将小鼠随机分为正常对照组、模型组、联苯双酯阳性组(0.2mg·kg-1)、狗蚁草乙酸乙酯部位高剂量组(相当于生药量40g·kg-1)、中剂量组(相当于生药量20g·kg-1)、低剂量组(相当于生药量10g·kg-1),各组小鼠灌胃相应药物,1次/天,连续10天,分别用CCl4和D-DalN造成小鼠急性肝损伤模型,测定小鼠血清中谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)和谷草转氨酶(Aspartatetransaminase,AST)含量,取小鼠肝脏制作HE染色病理切片观察肝脏病变程度,研究狗蚁草乙酸乙酯部位对急性肝损伤小鼠的保护作用。  将小鼠随机分为正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.2mg·kg-1)、狗蚁草乙酸乙酯部位高剂量组(相当于生药量40g·kg-1)、中剂量组(相当于生药量20 g·kg-1)、低剂量组(相当于生药量10g·kg-1)。除对照组外,各组小鼠皮下注射CCl4,1次/3天,连续8周,造模同时,各组小鼠灌胃相应药物,1次/天,连续8周。第8周末,检测各组小鼠血清ALT、AST含量和肝组织超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)、丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)含量、Ⅰ型胶原蛋白(Collagen TypeⅠ,ColⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(Collagen TypeⅢ,ColⅢ)、Ⅳ型胶原蛋白(Collagen TypeⅣ,ColⅣ)、转化生长因子(TGF-β1)、血小板衍生因子(Platelet-derived growth factor,PDGF)、基质金属蛋白酶抑制因子1(Tissue inhibitor of metalloproteinases1,TIMP-1)含量。制作肝组织HE染色和MASSON染色病理切片,观察切片并进行评分。采用RT-PCR方法检测ColⅠ、ColⅡ、ColⅣ、TGF-β1、PDGF在肝脏中的基因表达情况。  结果:狗蚁草乙醇部位10%、乙酸乙酯部位10%、5%、2.5%含药血清对HSC-T6的增殖有抑制作用(P<0.05)。  狗蚁草乙酸乙酯部位高剂量(相当于生药给药量40g/kg)、中剂量(相当于生药给药量20g/kg)、低剂量(相当于生药给药量10g/kg)可以降低CCl4造成的急性肝损伤小鼠血清中ALT和AST的含量(P<0.05);狗蚁草乙酸乙酯部位高剂量(40g/kg)、中剂量(20g/kg)可改善肝脏的病理损伤程度。乙酸乙酯部位高剂量(40g/kg)、中剂量(20g/kg)、低剂量(10g/kg)可降低D-DalN造成的急性肝损伤小鼠血清中ALT和AST含量(P<0.05或P<0.01);乙酸乙酯部位高剂量(40g/kg)、中剂量(20g/kg)可改善肝脏的病理损伤程度。  狗蚁草乙酸乙酯部位高剂量(相当于生药给药量40g/kg)可降低CCl4所致肝纤维化小鼠的死亡率,减轻肝脏气球样变、炎症细胞浸润等病变程度,可降低肝脏胶原蛋白的生成,降低Ishak评分(P<0.01),降低血清中ALT和AST含量(P<0.01),降低肝脏中MDA、Hyp、ColⅠ、ColⅢ、ColⅣ、TGF-β1、PDGF等的含量(P<0.05或P<0.01),降低ColⅠ、 ColⅢ、ColⅣ、TGF-β1、PDGF基因在肝脏中的转录(P<0.01);狗蚁草乙酸乙酯部位中剂量(相当于生药给药量20g/kg)可降低CCl4所致肝纤维化小鼠的死亡率,减弱肝脏气球样变、炎症细胞浸润肝脏病变程度,降低肝脏胶原的增生,降低Ishak评分(P<0.01),降低血清中ALT和AST含量(P<0.05或P<0.01),降低肝脏中MDA、Hyp、ColⅠ、ColⅣ、TGF-β1、PDGF的含量(P<0.05或P<0.01),降低ColⅠ、ColⅢ、TGF-β1、PDGF在肝脏中的转录(P<0.05或P<0.01);狗蚁草乙酸乙酯部位低剂量(相当于生药给药量10g/kg)可以降低CCl4所致肝纤维化小鼠的死亡率,降低血清中ALT和AST含量(P<0.05或P<0.01),降低肝脏Hyp含量(P<0.01),降低PDGF在肝脏中的表达(P<0.01)。  结论:狗蚁草乙酸乙酯部位可以抑制HSC-T6细胞的增殖,对CCl4和D-DalN造成急性肝损伤小鼠有保护作用。狗蚁草乙酸乙酯部位可以通过降低CCl4所致肝纤维化小鼠肝脏MDA、Hyp、ColⅠ、ColⅣ、TGF-β1、PDGF的含量,降低ColⅠ、ColⅢ、ColⅣ、TGF-β1、PDGF基因的转录,从而对CCl4所致的肝纤维化小鼠发挥保护作用。
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