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目的：探讨菟丝子含药血清对SD大鼠胚胎肢芽发育的影响。方法：1.采用中药血清药理学方法制备菟丝子含药血清。选取24只SD雄鼠随机分为实验3组和阴性对照组,每组6只。实验组每日按照40g/kg20g/kg、10g/kgBW灌胃,分别制备高、中、低剂量菟丝子含药血清,阴性对照组采用蒸馏水(1ml/100gBW)灌胃后制备正常血清。2.大鼠胚胎前肢芽器官培养：取大鼠E15前肢芽,随机分为3个实验组、阴性对照组和阳性对照组。实验组分别加入培养体积10%的高、中、低剂量菟丝子含药血清,阴性对照组加入正常血清,阳性对照组加入全反式维甲酸溶液。体外培养72h后收获肢芽,进行如下检测：(1)每组取12个肢芽,石蜡包埋、切片、HE染色观察肢芽器官发育分化情况。(2)取38个肢芽/组,阿利新兰染色后利用Neubert评分系统对软骨发育分化情况进行评分。(3)每组取30个肢芽,测量肢芽长度。3.大鼠胚胎后肢芽细胞微团培养：取大鼠E15后肢芽,制成肢芽细胞悬液。接种于细胞培养板中,如器官培养法分组加受试物。培养72h后收获肢芽细胞,进行如下检测：(1)肢芽细胞的增殖和分化情况：MTT法检测增殖情况,阿利新兰染色后通过软骨细胞集落数检测分化情况。(2) RT-PCR法检测各组肢芽细胞BMP-2、Collagen ⅡmRNA的表达水平。(3)Western Blot法检测各组肢芽细胞Collagen II蛋白的表达水平。结果：1.菟丝子含药血清对SD大鼠前肢芽器官的影响(1)经HE染色后,各组前肢芽均可见肩胛骨、肱骨、尺骨、桡骨、掌骨的软骨,未见腕骨。菟丝子含药血清低、中剂量组的肢芽和阴性对照组肢芽的结构一样,细胞排列整齐,软骨轮廓清晰,指突明显,结构完整。高剂量组细胞排列整齐,软骨出现,轮廓较清晰,但指突不如阴性对照组的明显。(2)经阿利新兰染色后,各组前肢芽长骨均清晰可见,未见腕骨,掌指骨尚未发育完善。阳性对照组掌指骨发育分化最差,Neubert评分最低,与阴性对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。菟丝子含药血清低剂量和中剂量组掌指骨发育分化好,Neubert评分高,与阴性对照组比较无显著性差异(P>0.05)。高剂量组肢芽掌指骨发育分化较差,与阴性对照比较具有显著性差异(P<0.05)。(3)各组前肢芽分段测量后,加药组前肢芽肩与腕之间A段长度、腕与指末端之间B段长度均小于阴性对照组,与之比较具有显著性差异(P<0.05)。2.菟丝子含药血清对SD大鼠胚胎肢芽细胞的影响：(1)菟丝子含药血清对肢芽细胞增殖和分化情况：实验组均促进了肢芽细胞增殖,其中低和中剂量组数据与阴性对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。中剂量组所形成的软骨细胞集落数最多,与阴性对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。而高剂量组所形成的集落数少,与阴性对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。(2)菟丝子含药血清对肢芽细胞中BMP-2mRNA表达的影响：低和中剂量组BMP-2mRNA的表达水平高,与阴性对照组比较具有显著性差异(P<0.05)。高剂量组BMP-2mRNA的表达水平低,与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05)。(3)菟丝子含药血清对肢芽细胞中Collagen Ⅱ mRNA和蛋白表达的影响：实验组Collagen Ⅱ mRNA和蛋白的表达水平均较高,与阴性对照组比较均具有显著性差异(P<0.05)。结论：1.各剂量菟丝子含药血清对SD大鼠前肢芽整体总长度的发育均具有一定影响,其中高剂量的抑制效果明显。低、中剂量菟丝子含药血清对前肢芽中软骨的形成无影响,而高剂量菟丝子含药血清对前肢芽软骨的发育具有一定抑制作用,存在潜在的胚胎发育毒性。2.各剂量组菟丝子含药血清均促进肢芽细胞增殖,以低剂量组最为显著。中剂量菟丝子含药血清可促进肢芽细胞的分化,高剂量却抑制了肢芽细胞的分化。3.低和中剂量菟丝子含药血清可使BMP-2mRNA的表达水平升高,高剂量使BMP-2mRNA的表达水平下调。高、中、低剂量菟丝子含药血清均可提高Collagen Ⅱ mRNA和Collagen Ⅱ蛋白的表达水平。