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目的：芸香科蜜茱萸属植物三桠苦(Melicope ptelefolia (Champ.ex Benth.) Hartley)始载于《岭南采药录》,现收载于《广东省中药材标准》,既为岭南地区常用中草药,也是广东凉茶的常用配方组分,一般用来治疗跌打损伤、外伤、脓疮、湿疹等病。现已运用该药材开发出三九胃泰、三九感冒灵等多种中成药,销路很好,市场占有率高,创造了很好的经济效益,该药材原植物在广东各地区分布广泛,来源十分丰富,但因其化学成分研究部分相对空白,有效成分不明确,无法对该药材的质量进行有效全面的控制,因而在《中国药典》中未将其收录在内。由于该药材在临床上的药理功效,为了更好的控制该药材的质量,明确该药材的化学成分,寻找其主要有效成分或以其主要有效成分结构母核为基础的药物先导化合物,确定该药材的质量标准,对药材进行二次开发有着十分重要的意义。目前,三桠苦的研究主要集中在低极性部位,而对中高极性部位的研究基本空白,传统上是采用三桠苦的水提物,可见三桠苦的活性部位可能在中高极性部位。因此,找出三桠苦叶的抑制一氧化氮活性成分,并建立三桠苦叶的指纹图谱有其重要的意义。方法：化学成分研究,取三桠苦叶药材粗粉用80%乙醇冷浸24小时,再渗漉,得渗漉液,减压回收溶剂,得提取物浸膏,取160～200目硅胶、硅藻土与浸膏拌匀,装入索氏提取器,依次用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇连续回流提取。所得丙酮部位和甲醇部位,利用硅胶、Sephadex LH-20、反向ODS硅胶等分离技术进行分离纯化,得到单体化合物。综合运用质谱(MS)及核磁共振光谱(1H-NMR,13C-NMR, DEPT,1H-1H-COSY, HSQC, HMBC)等现代光谱和波谱学技术鉴定所得单体化合物的化学结构。体外生物活性筛选,小鼠巨噬细胞株RAW264.7,用DMEM完全培养液(含10%胎牛血清,100U·m1-1青霉素及100μg·m1-1链霉素)在37℃、5%CO2培养箱中传代培养3代,取对数生长期细胞用于实验。处于对数生长期时的细胞,用0.25%的胰酶消化细胞,调节细胞浓度为2.5×104个·m1-1,接种于48孔板,250μ1/孔。待细胞80%汇合后,进行分组。分为：空白对照组,LPS组、各种样品组(预处理细胞1h),再用1μg·ml-1LPS刺激细胞24h。24h后,收集上清,并按试剂盒说明书测定NO含量。按公式：NO抑制率求出NO抑制率。指纹图谱研究,采用HPLC去对19批三桠苦叶进行指纹图谱构建,运用指纹图谱参数共有峰和相似度进行分析,并采用SPSS软件对19个批次的指纹图谱所得的数据进行聚类分析和主成分分析。结果：从三桠苦叶丙酮部位和甲醇部位中共分离得到21个化合物,并通过理化性质和光谱解析鉴定了19个化合物。其中,苯乙酮类化合物1个,鉴定为：为1-[2,7-双-(3,4-羟基-四氢呋哺-2-基)-2,4,7-羟基-2,3,7,8-四氢苯并[1,2-b；3,4-b’]二呋哺-5-基]-甲酮(化合物1)。黄酮类化合物12个,分别鉴定为：山奈酚-3-O-αt-L-鼠李糖基(1→2)-β-D-半乳糖苷(化合物2)、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯(化合物3),山奈酚-3-O-a-D-葡萄糖基(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖苷(化合物4),异鼠李素(化合物5),山奈酚(化合物6),山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(化合物7),山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷(化合物8),槲皮素(化合物9),山奈酚-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(化合物10),3,5,7,3’-四羟基-8,4’-二氧甲基黄酮(化合物11),3,5,3’-三羟基-4’-氧甲基-7-异戊烯氧基黄酮(化合物12),3,5,4’-三羟基-8,3’二氧甲基-7-异戊烯氧基黄酮(化合物13)；甾体类化合物2个：p-谷甾醇(化合物15)和胡萝卜苷(化合物16)；其它化合物4个：肌醇(化合物14),葡萄糖(化合物17),鼠李糖(化合物18),棕榈酸(化合物19)。对三桠苦中分离得到的化合物进行了NO活性筛选,结果显示,异鼠李素、山奈酚、3,5,7,3’-四羟基-8,4’-二氧甲基黄酮、肌醇、槲皮素、谷甾醇Tricosanoic acid tetradecyl ester、香草酸、异鼠李素-3-O-a-L-阿拉伯吡喃糖苷、山奈酚-3-O-芸香糖苷、3,7-二甲氧基山奈酚、3,5,4’-三羟基-8,3’-二甲氧基-7-异戊烯氧基黄酮、3,5,3’-三羟基-4’-甲氧基-7-异戊烯氧基黄酮、3,5,3’-三羟基-8,4’-二甲氧基-7-异戊烯氧基黄酮、赤式-3-(1’,2’,3’-三羟基)异戊基-7-羟基香豆素这十五个化合物在不同浓度下都具有明显的抑制小鼠巨噬细胞释放一氧化氮活性(P<0.05)。而棕榈酸、胡萝卜苷、山奈酚-3-O-p-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖醛酸甲酯、山奈酚-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷、山奈酚-3-O-a-D-葡萄糖基(1→2)-p-D-葡萄吡喃糖苷、山奈酚-3-O-p-D-葡萄糖醛酸、三桠苦丁素、S26、S27的抑制小鼠巨噬细胞释放一氧化氮的活性因浓度的不同而不同,在低浓度时表现出抑制活性,而在高浓度时却无抑制活性。建立了三桠苦叶的HPLC指纹图谱,得到了12个共有峰,相似度在0.69-0.98,19批药材聚成3类。结论：从三桠苦叶丙酮部位中共分离得到21个化合物,并通过理化性质和光谱解析鉴定了19个化合物。其中,苯乙酮类化合物1个,为新化合物；黄酮类化合物12个,甾体类化合物2个,其它化合物4个。化合物2、3、4、6、8、9、11、14、17、18首次从该属中分离得到,化合物19首次从该种中分离得到。对三桠苦中分离得到的化合物进行了抑制一氧化氮活性筛选,结果显示,十五个化合物在不同浓度下都具有明显的抑制小鼠巨噬细胞释放一氧化氮活性。十个化合物的抑制小鼠巨噬细胞释放一氧化氮的活性因浓度的不同而不同,在低浓度时表现出抑制活性,而在高浓度时却无抑制活性。三桠苦叶的HPLC指纹图谱的构建和化学模式的识别为药材质量控制提供更全面的参考。