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目的沉默高尔基体磷蛋白-3基因在胃癌细胞株中的表达,观察其对胃癌细胞侵袭、迁移的影响,探讨mTOR/STAT3信号通路在上述过程中的作用及机制。方法构建高尔基体磷蛋白-3基因RNA干扰慢病毒载体和慢病毒阴性对照载体,用慢病毒法转染胃癌细胞SGC-7901,在荧光显微镜下观察慢病毒转染后胃癌细胞内绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况。采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)和蛋白印迹(Western Blotting, WB)法分别检测GOLPH3在空白对照组(未转染慢病毒的胃癌细胞SGC-7901)、阴性对照组(转染空载载体的胃癌细胞SGC-7901)和GOLPH3-siRNA组(转染GOLPH3-siRNA载体的胃癌细胞SGC-7901)中的基因水平和蛋白水平的表达;应用Transwell小室和Matrigel基质胶检测GOLPH3基因沉默后胃癌细胞侵袭、迁移能力的变化;Western blotting法检测各组细胞mTOR、磷酸化mTOR (p-mTOR)、STAT3、磷酸化STAT3 (p-STAT3)蛋白的表达水平。结果成功建立了稳定转染的胃癌细胞SGC-7901,转染效率接近90%,在体外能够长期稳定表达绿色荧光蛋白;GOLPH3-siRNA组GOLPH3 mRNA的相对表达量均低于阴性对照组和空白对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),而阴性对照组GOLPH3 mRNA相对表达量和空白对照组相比无明显差异(P> 0.05);空白对照组、阴性对照组、GOLPH3-siRNA组中GOLPH3蛋白表达量分别为:0. 91±0. 09, 0. 90±0. 04, 0. 38±0. 05,GOLPH3-siRNA 组中GOLPH3蛋白表达量较两对照组明显降低,差别有统计学意义(均P <0.05),而空白对照组与阴性对照组GOLPH3蛋白表达量无明显差异(P >0.05); Transwell小室侵袭实验显示GOLPH3-siRNA组胃癌细胞穿越Matrigel基质胶的细胞数(70. 3±8. 5),明显低于阴性对照组(171. 67±3. 2)和空白对照组(167. 6±11. 0),差别有统计学意义(均P<0. 05); Transwell小室迁移实验显示GOLPH3-siRNA组胃癌细胞通过聚碳酸酯微孔滤膜的细胞数(82. 0±3. 6),明显低于阴性对照组(177.0±5. 29)和空白对照组(174. 3±4. 7),差别有统计学意义(均户 <0. 05); Western blotting检测结果显示,GOLPH3-siRNA组细胞中p-mTOR、p-STAT3蛋白表达量较两对照组降低,差别有统计学意义(均P <0.05)。结论1.沉默GOLPH3基因的表达能抑制胃癌细胞的侵袭和迁移能力;2.沉默GOLPH3的表达能下调mTOR、STAT3蛋白的磷酸化水平,GOLPH3基因可能通过影响mTOR/STAT3信号转导通路相关蛋白磷酸化水平,对胃癌的侵袭和迁移发挥作用。