Ang Ⅱ受体拮抗剂对HepG2细胞生物学行为及内皮型一氧化氮合酶、小凹蛋白-1表达的影响

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目的:(1)探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)及AngⅡ受体拮抗剂对HepG2肝癌细胞生物学行为的影响。(2)研究AngⅡ受体拮抗剂对Hep G2肝癌细胞中内皮型一氧化氮合酶、小凹蛋白-1表达的影响。方法:对Hep G2肝癌细胞进行复苏、体外培养及传代。培养板配置悬液,在培养箱中培养24h。设立空白调零组,加入浓度10-7mol/L的AngⅡ及浓度为10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L的AngⅡ受体拮抗剂厄贝沙坦处理,培育12、24、36、48h,加入CCK溶液检测不同时间点AngⅡ受体拮抗剂对Hep G2肝癌细胞增殖的影响。选取6孔板配置悬液,培养24h。采用划痕试验观察加入10-7mol/L浓度的AngⅡ及不同浓度的AngⅡ受体拮抗剂处理组细胞侵袭的能力。每隔12h作为观察时间点。选取96孔板,配置细胞悬液,每组设10个复孔,孵育过夜后加入AngⅡ及不同浓度AngⅡ受体拮抗剂,孵育24h,加入CCK-8溶液,测定450nm各孔吸光值,各重复孔OD值取平均数计算细胞活力。细胞传代至60mm培养皿,采用Western-Blot方法检测各组细胞中小凹蛋白-1(caveolin-1)的表达水平。结果:AngⅡ能够促进Hep G2肝癌细胞的增殖能力,AngⅡ受体拮抗剂能抑制AngⅡ的促增殖作用。随着AngⅡ受体拮抗剂浓度的增加,拮抗作用明显增强,当AngⅡ受体拮抗剂浓度为10-6mol/L,作用时间为36h时,抑制作用达到最高峰。AngⅡ也能促进Hep G2肝癌细胞的侵袭能力,AngⅡ受体拮抗剂能够抑制肝癌细胞的侵袭作用及细胞活力。当AngⅡ受体拮抗剂浓度为10-5mol/L时,肝癌细胞检测指标与浓度为10-6mol/L进行对比,检测结果无统计学意义(P>0.05);与对照组数据对比,检测结果有统计学意义(P<0.05);Western-Blot结果显示随着AngⅡ受体拮抗剂厄贝沙坦浓度的增加,细胞中caveolin-1蛋白的含量呈现逐渐下降的趋势。相比于对照组而言,差异有统计学意义(P<0.05);结论:(1)AngⅡ能够促进肝癌细胞的增殖、侵袭能力,AngⅡ受体拮抗剂能够抑制肝癌细胞的增殖、侵袭及活力。(2)AngⅡ受体拮抗剂能抑制肝癌细胞中caveolin-1蛋白的表达,继而减弱肝癌细胞的运动和侵袭能力。
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