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遗传性牙本质疾病分为遗传性牙本质发育不全(Dentinogenesis imperfecta, DGI)和牙本质发育不良(dentin dysplasia)。DGI分为3型:I型(DGI-I),患者伴有成骨发育不全的症状;II型(DGI-II),即传统所说的牙本质发育不全,又名遗传性乳光牙本质;III型(DGI-III),又名白兰地型牙本质发育不全,最早发现于美国马里兰州的3个隔离民族群中。DD分为2型:I型(DD-I),患者牙齿外表正常,但X线显示异常;II型(DD-II),乳牙和DGI-II相似,恒牙外表正常,仅在X线下可以异常。目前研究认为DGI-II是由于DSPP基因发生突变而产生的。但不同家系突变位点不同,甚至也有报道未发现突变的家系。为进一步了解湖北一新发现的DGI-II家系的致病原因,我们对该家系进行了样本的采集和DSPP基因的测序。以了解改家系DSPP启动子和非高度重复序列编码区内是否含有致病突变,以及发生DGI-II疾病的分子机制。1遗传性牙本质发育不全Ⅱ型家系样本的采集和基因组的获取为了进一步筛选候选区域的编码序列,寻找更多的候选基因,本研究收集了中国湖北阳新的牙本质发育不全II型家系,一共5代94人(获得DNA样本人数70)。患者牙齿呈半透明的灰色至黄褐色改变、牙冠呈钝圆球型、釉质剥落,牙本质较软,全口牙磨损明显,X线显示髓腔狭窄或闭塞,根管变细,牙根短,乳、恒牙均受累,但无成骨不全症状,也没有听力丧失,确诊为DGI-II。本研究成功从患者外周血提取DNA基因组,以供下一步的突变基因检测研究使用。2遗传性牙本质发育不全II型致病基因的检测随着研究的不断深入,在部分家系DSPP基因上发现了多处互不相同的突变。突变主要发生在DSP上,引起DSPP蛋白表达的异常、或物理性质的改变。为进一步了解DSPP在该湖北DGI-II家系中是否存在致病突变,我们采用PCR方法对DSPP启动子和非高度重复序列编码区进行了扩增,通过DNA直接测序进行突变筛查,以试图在基因水平说明其致病原因。检测结果发现:(1)该遗传性牙本质发育不全II型家系的牙本质涎磷蛋白启动子区和非高度重复序列编码区未检测到与疾病表型相关的特异性改变。(2)在牙本质涎蛋白编码区检测到不同个体之间具有多态性;外显子4中有2个SNP多态,c.847 A/G(p.243N/D,rs3750025)、c.1017G/A(rs2736982,p.299S);外显子5中c.1447 T/C(p.443G)。其中有1个多态氨基酸发生改变,2个多态氨基酸没有发生改变。但和表型都没有一一对应的关系。由于外显子5的高度重复序列编码区基因序列的特异性,不能对其直接进行PCR产物测序。因此在目前的研究基础上,以后可能的研究方向有:使用TOPO的克隆方法对外显子5的高度重复序列编码区测序;对家系进行连锁分析,并检测其他候选基因。