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目的:本实验第一部分首先研究缺氧状态下胃癌细胞MGC803中HIF-1α、微小RNA-210(microRNA-210,mi R-210)及EMT标志物(E-钙黏蛋白、Twist1)的RNA相对表达量变化,再通过向胃癌细胞转染miR-210 mimics,上调miR-210的表达后,检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Twist1的RNA相对表达量的变化,探讨miR-210是否影响胃癌上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的发生;第二部分通过临床实验检测正常人与胃癌患者外周血中miR-210的表达差异,并进行临床特征分析,以研究mi R-210的异常表达在胃癌患者中的临床意义。方法:1、选取200μmol/L浓度的CoCl2溶液与胃癌细胞MGC803共培养4h(浓度和作用时间参见前期工作),进行化学法诱导胃癌细胞出现缺氧状态,用qRT-PCR方法检测缺氧组与常氧组的HIF-1α、miR-210的相对表达量及EMT标志物(E-cadherin、Twist1)的RNA相对表达量。2、应用转染试剂Lipo 2000向胃癌细胞MGC803瞬间转染miR-210 mimics,转染完成后再培养24小时,用qRT-PCR检测E-cadherin、Twist1的RNA相对表达量在转染前后的差异。3、取胃癌患者及正常人外周血,加入淋巴细胞分离液离心后,取中间薄膜状淋巴单核细胞层,应用qRT-PCR检测miR-210的相对表达量,比较胃癌患者与健康对照组表达的差异,并进一步分析mi R-210的相对表达量与患者临床特征的关系。结果:1、缺氧组与常氧组相比,HIF-1α的相对表达量分别为2.29±0.31vs1±0.09,缺氧组与常氧组的比较有统计学意义(P=0.001)。缺氧组与常氧组miR-210的相对表达量分别为3.36±0.05vs1±0.15;缺氧组与常氧组E-cadherin的相对表达量分别为0.31±0.05vs1±0.05;缺氧组与常氧组Twist1的相对表达量分别为1.75±0.30vs1±0.03。上述各项中缺氧组与常氧组的比较均有统计学意义(P<0.05)。2、转染miR-210 mimics的实验组与对照组相比miR-210的相对表达量分别为678.14±54.30vs1±0.02;实验组和对照组中E-cadherin的RNA相对表达量分别为0.60±0.02vs1±0.07;实验组和对照组中Twist1的RNA相对表达量分别为1.24±0.04vs1±0.06,各项中实验组与对照组的比较均有统计学意义(P<0.05)。3、23例胃癌患者与15例健康对照组外周血中miR-210的相对表达量的平均值分别为2.21±1.60vs1±0.11,比较有统计学差异(P=0.002);23例胃癌患者外周血中miR-210的相对表达量与患者临床特征的分析中,miR-210高表达与胃癌的转移有明显相关性(P=0.008),与患者的性别、年龄、肿瘤大小、分化程度无关。结论:1、缺氧可促进胃癌细胞中miR-210高表达,上调mi R-210可能促进胃癌EMT过程的发生。2、MiR-210可能是缺氧诱导胃癌EMT发生的中间环节之一。3、胃癌患者外周血中miR-210相对表达量较健康对照组明显增加,且转移组中miR-210的相对表达量较高,说明mi R-210可能与预后不良有关。