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背景与目的：胃癌(Gastric cancer, GC)是临床上最常见的恶性肿瘤之一,在肿瘤致死病因中高居第二位。其中,胃腺癌(Gastric adenocarcinoma)是胃癌的主要组织学类型,其发病率占胃恶性肿瘤发病率的95%。肿瘤的侵袭转移是导致胃癌患者死亡的主要原因。因此,研究肿瘤的侵袭转移机制对降低癌症恶性行为及提高患者生存质量有重大意义。上皮-间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程,在肿瘤的演进过程中发挥重要作用。大量研究表明miRNA参与了多种病理生理过程,它在EMT过程中的作用不可小觑。文献表明：血清miR-1246与食管鳞状细胞癌的TNM分期有关；miR-1246等六个血清miRNAs的表达水平能够预测早期宫颈鳞状细胞癌的淋巴结转移。p53及其类似物p63和p73能靶向作用于miR-1246,后者通过抑制DYRK1A (dual-specificity tyrosine-(Y)-phosphorylation regulated kinase1A)的表达,进而活化NFAT (nuclear factor of activated T cells),从而引起细胞凋亡,发挥抗癌功能。本课题组在前期探讨EGFL7与胃腺癌侵袭转移关系的过程中,发现在不同的处理组hsa-miR-1246(以下简称miR-1246)存在显著的差异表达,因此我们推测miR-1246可能参与了对胃癌侵袭转移的调节,其机制有待进一步的深入探讨。本研究拟以胃腺癌细胞株BGC823和胃腺癌、胃腺癌癌旁黏膜及胃黏膜良性病变(胃炎及胃溃疡)组织石蜡块为研究对象,初步探讨miR-1246对胃癌发生和EMT的影响。方法：(1)采用探针法荧光定量PCR在组织水平检测高、中、低分化胃腺癌组织石蜡标本miR-1246的相对表达水平。每组样本随机抽取相应癌旁胃黏膜组织石蜡标本进行其miR-1246相对表达水平的检测。选取12例胃良性病变(胃炎或胃溃疡)的胃黏膜组织石蜡标本,进行其miR-1246相对表达水平的检测。统计分析miR-1246的相对表达水平与胃黏膜腺体分化水平及临床参数之间的关系。(2)采用免疫组织化学技术和免疫组化评分标准分析胃腺癌石蜡标本中E-cadherin和Vimentin的蛋白表达水平,分析其与miR-1246及各项临床数据的关系。(3)采用慢病毒作为载体,对BGC823细胞分别稳定转染miR-1246前体及阴性对照,在荧光显微镜下确定转染效率,经嘌呤霉素筛选得到两个稳定细胞株。用探针法荧光定量PCR检测miR-1246在BGC823miR-1246过表达组、BGC823mimics NC组和BGC823本底组的相对表达水平,确认转染成功,再用Western blotting检测E-cadherin和vimentin在三组中的表达水平。拍照并观察三组细胞的形态学变化。结果：(1)miR-1246在胃腺癌、胃腺癌癌旁和胃良性病变黏膜组织石蜡标本中的相对表达水平有升高的趋势,其中胃腺癌组和胃良性病变组之间的差异有统计学意义(P<0.05),余均无统计学意义(P>0.05)。miR-1246的相对表达水平在高分化、中分化和低分化胃腺癌组织石蜡标本中有降低的趋势,但两两之间差异无统计学意义(P>0.05)。miR-1246的相对表达水平有随TNM分期增高而降低的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。(2) E-cadherin在胃腺癌中的表达水平随组织分化水平增高而增高,Vimentin随之降低,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。E-cadherin在胃腺癌中的表达水平有随TNM分期增高而降低,Vimentin随之增高的趋势,各组间差异除在E-cadherin的T stage组间有统计学意义(P<0.05),余各组间差异无统计学意义(P>0.05)。miR-1246在E-cadherin阳性组的相对表达水平高于E-cadherin阴性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。miR-1246在Vimentin阳性组的相对表达水平低于Vimentin阴性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3) BGC823细胞株分别经过慢病毒载体pre-hsa-miR-1246mimics和慢病毒载体mimics阴性对照稳定转染后(转染效率在90～95%以上),建立了稳定的BGC823miR-1246高表达细胞株和BGC823miR-1246阴性对照细胞株。BGC823miR-1246高表达细胞株的miR-1246的相对表达水平增高,差异有统计学意义(P<0.05); E-cadherin蛋白表达水平在BGC823miR-1246高表达细胞株中相对其它两细胞株增高,vimentin蛋白表达水平在BGC823miR-1246高表达细胞株中相对其它两细胞株有所降低。BGC823细胞形态在慢病毒载体mimics阴性对照组及空白对照组和慢病毒载体pre-hsa-miR-1246mimics组之间发生改变,由前两组的以梭形为主变为后一组的以椭圆形或圆形为主。Chi-square检验得出BGC823miR-1246高表达组和BGC823miR-1246mimics阴性对照组、BGC823空白对照组中梭形细胞比率的差异均有统计学意义(P<0.001)结论：(1)证明在人胃腺癌组织中存在miR-1246表达异常。(2)miR-1246在胃腺癌中表达水平的降低可能参与了其EMT的发生。图13幅,表14个,参考文献40篇。