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目的:采用大鼠C6胶质瘤细胞系作为实验对象,观察铜绿假单胞菌(PA-MSHA)制剂对体外培养的C6胶质瘤细胞生长抑制作用,探讨PA-MSHA在体外引起肿瘤细胞生长抑制的作用机制.为胶质瘤术后辅助治疗探索切实有效的新方法。方法:通过体外培养大鼠C6神经胶质瘤细胞,测定细胞活力、细胞贴壁率,并于96孔板内,分别接种1×10~3/孔、3×10~3/孔、5×10~3/孔三个浓度的C6细胞,MTT比色法测定6h、12h、24h、48h、72h、96h的OD值,绘制生长曲线,计算细胞倍增时间,确定最佳细胞接种浓度及药物干预区间。MTT比色法测定不同时间、不同浓度PA-MSHA对C6胶质瘤细胞的增殖抑制率,计算细胞存活率及半数抑制浓度(IC50)。倒置显微镜观察细胞形态学变化。Hochest 33258染色,荧光显微镜下检测细胞凋亡,流式细胞仪检测PA-MSHA对细胞周期的影响。结果:本实验所用C6胶质瘤细胞,在常规培养条件下呈贴壁生长,生长状态良好,每次传代前活力测定,存活率均＞95%。检测不同时间点贴壁率,于2h、4h、6h、8h、10h、12h分别为20%、68%、82%、85%、92%、98%、符合本实验要求,MTT测定的生长曲线提示按照5×10~3/孔的浓度接种于96孔板内,100μL培养液(含10%小牛血清的RPMI1640)可提供足够的细胞生长空间及营养成分,使细胞于接种12小时后,适应新环境,逐渐进入快速繁殖期。本实验选取细胞接种于96孔板后的24h～72h之间的48小时内,该区间能够保证细胞始终处于一个稳定的对数生长期。在此实验基础上,MTT法检测不同浓度PA-MSHA对C6胶质瘤细胞的影响,结果提示,细胞生长抑制率具有时间和剂量依赖性,并计算24小时和48小时IC50值分别为(5.80±1.79)×10~8cfu/ml和(3.90±2.14)×10~8cfu/ml。Hochest33258染色可见明显的细胞凋亡形态学改变,流式细胞术药物作用组可见典型的亚二倍体峰即凋亡峰(AP),且随浓度加大S期比例明显增多,提示铜绿假单胞菌(PA-MSHA)制剂可诱导C6细胞凋亡,使其细胞周期阻滞于S期,抑制细胞增殖。结论:1.铜绿假单胞菌(PA-MSHA)制剂抑制C6细胞的增殖,使细胞周期阻滞于S期,对C6胶质瘤细胞增殖抑制作用具有时间、剂量依赖性。2.铜绿假单胞菌(PA-MSHA)制剂诱导C6胶质瘤细胞凋亡。3.铜绿假单胞菌(PA-MSHA)制剂可能是有前景的抗脑胶质瘤药物,尤其在胶质瘤局部治疗方面可能有更广阔的应用前景,有必要进一步深入研究。