迷迭香酸苷对禽流感引起的病毒性肺炎小鼠保护作用研究

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目的建立高致病H7N9禽流感病毒引起的肺炎小鼠模型,评价肿节风中抗流感病毒活性成分迷迭香酸苷对禽流感病毒感染小鼠肺炎模型的治疗作用。进一步研究迷迭香酸苷对禽流感病毒感染后所诱导的相关炎症因子和TLRs/NF-κB信号传导通路相关蛋白的调控作用,探讨迷迭香酸苷抗禽流感病毒的作用机制,为研发新型抗流感药物提供依据。方法本实验测定H7N9禽流感病毒的LD50。将50只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、利巴韦林组、迷迭香酸苷高、低剂量组,采用滴鼻2倍LD50 H7N9禽流感病毒感染小鼠的方法,建立禽流感病毒性肺炎动物模型;研究迷迭香酸苷对H7N9禽流感病毒性肺炎小鼠的死亡保护作用、肺指数、肺部组织形态及肺部病毒载量的影响。采用ELISA法检测迷迭香酸苷对禽流感病毒性肺炎小鼠血清中炎症因子IL-6和IFN-γ水平的调节作用。Western Blot检测迷迭香酸苷对禽流感病毒性肺炎小鼠肺组织中TLRs/NF-κB信号传导通路中TLR7、MyD88和NF-κB p65蛋白表达的影响。结果测得H7N9禽流感病毒的LD50为10-2.383。与正常组比较,H7N9禽流感病毒感染小鼠后死亡率达90%,可对小鼠肺组织造成严重的病理性损伤,增加肺指数(P<0.01),显著升高模型小鼠血清中IL-6和IFN-γ的水平(P<0.01),上调模型小鼠肺组织中TLR7、MyD88和NF-κB p65蛋白表达(P<0.01)。与模型组比较,迷迭香酸苷能显著降低H7N9禽流感病毒性肺炎小鼠死亡率,延长平均生存天数(P<0.01);可有效降低H7N9禽流感病毒性肺炎小鼠肺指数(P<0.01),能明显减轻病毒引起的肺组织病理性损伤。同时,迷迭香酸苷能显著降低禽流感病毒性肺炎小鼠血清中IL-6和IFN-γ的水平(P<0.01),可下调模型小鼠肺组织中TLR7、MyD88和NF-κB p65蛋白表达。结论H7N9禽流感病毒对小鼠易感,可诱导病毒性肺炎,并导致小鼠死亡。迷迭香酸苷对禽流感病毒H7N9引起的病毒性肺炎小鼠有显著的保护作用。迷迭香酸苷可明显降低高致病性禽流感病毒感染小鼠的肺指数、肺部病毒载量、肺组织病理改变严重程度和血清中IL-6、IFN-γ水平,表明迷迭香酸苷可能通过减轻炎症反应治疗病毒性肺炎。迷迭香酸苷抑制TLRs/NF-κB信号传导通路中TLR7、MyD88和NF-κB p65蛋白表达,推测迷迭香酸苷可能通过抑制炎症反应,阻断细胞因子风暴,减轻肺部病理损伤,发挥抗病毒作用。
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