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背景Cofilin1是肌动蛋白运动的调节因子,通过调控细胞骨架actin的重组促进伪足形成进而参与肿瘤细胞的运动,从而在肿瘤细胞转移与侵袭中起到不可或缺的作用。已有研究表明蛋白棕榈酰化修饰可能通过改变被修饰蛋白的功能进而影响了肿瘤细胞的增殖或迁移。本课题前期通过分析宫颈癌及其癌旁组织的蛋白棕榈酰化组学发现Cofilin1是潜在的棕榈酰化修饰蛋白。查阅文献发现Cofilin1棕榈酰化修饰在宫颈癌中的分子功能和潜在调控机制未知。因此,本课题以Cofilin1的棕榈酰化修饰为切入点,首先确定蛋白的棕榈酰化修饰位点,鉴别对其起修饰作用的棕榈酰化修饰酶和去棕榈酰化修饰酶,进而研究Cofilin1的棕榈酰化修饰在宫颈癌迁移与侵袭中的作用,为探究Cofilin1的棕榈酰化修饰对宫颈癌迁移与侵袭调控的分子机制奠定基础。目的通过验证Cofilin1的棕榈酰化修饰及其动态调节过程,探究其棕榈酰化修饰对He La细胞迁移与侵袭的调控。方法1.Cofilin1棕榈酰化修饰的鉴定:ABE（Acyl-biotinyl exchange）,RAC（Resin-assisted Capture）,Western blot实验检测Cofilin1的棕榈酰化修饰。2.Cofilin1棕榈酰化修饰位点的鉴定:构建突变体质粒,细胞转染,ABE,RAC,Western blot实验检测Cofilin1的棕榈酰化修饰位点。3.Cofilin1的棕榈酰化修饰酶的鉴定:细胞转染,ABE,RAC,Western blot,实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）实验筛选Cofilin1的棕榈酰化修饰酶。4.Cofilin1的去棕榈酰化修饰酶的鉴定:细胞转染,ABE,RAC,Western blot,免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）,细胞免疫荧光实验筛选Cofilin1的去棕榈酰化修饰酶。5.Cofilin1的棕榈酰化修饰在细胞迁移和侵袭过程中的影响:细胞划痕,Transwell迁移及Transwell侵袭实验检测Cofilin1的棕榈酰化修饰对He La细胞迁移与侵袭的影响。结果1.通过细胞转染,ABE,RAC,Western blot实验,结果显示NH2OH处理的实验组Cofilin1棕榈酰化修饰水平明显高于对照组;通过ABE,Western blot实验,结果显示随着2-BP加药处理时间的延长,Cofilin1的棕榈酰化修饰水平信号逐渐减弱,并在药物处理10 h后抑制效果最明显,结果表明Cofilin1是棕榈酰化修饰蛋白。2.通过蛋白纯化、质谱组学分析实验,结果显示Cys39的棕榈酰化修饰所占比例为4.29%,Cys80的棕榈酰化修饰比例所占为14.71%,Cys139的棕榈酰化修饰所占比例为12.77%,Cys147的棕榈酰化修饰所占比例为10.87%。通过细胞转染,ABE,RAC,Western blot实验,结果显示Cys80位点突变后棕榈酰化修饰水平下降明显,三位点突变体3C/A（C39A/C139A/C147A）的棕榈酰化修饰水平稍有降低;四位点突变体4C/A（C39A/C80A/C139A/C147A）的棕榈酰化修饰水平下降最显著,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;结果表明Cys39,Cys80,Cys139,Cys147均为棕榈酰化修饰位点,且Cys80位点的棕榈酰化修饰水平最高。3.通过细胞转染,ABE,RAC,Western blot实验,结果显示ZDHHC4,ZDHHC5,ZDHHC6能明显升高Cofilin1的棕榈酰化修饰水平,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;通过实时荧光定量PCR实验,结果显示ZDHHC4,ZDHHC5,ZDHHC6的表达量高于其它对照组,结果表明ZDHHC4,ZDHHC5,ZDHHC6是Cofilin1的棕榈酰化修饰酶。4.通过细胞转染,ABE,RAC,Western blot实验,结果显示PPT2能明显降低Cofilin1的棕榈酰化修饰水平,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;通过免疫共沉淀,Western blot实验,结果显示在He La细胞中PPT2能与Cofilin1结合;通过细胞免疫荧光实验,结果显示在He La细胞中PPT2能与Cofilin1发生共定位,结果表明PPT2是Cofilin1的去棕榈酰化修饰酶。5.通过细胞划痕及Transwell迁移实验,结果显示过表达突变体C80A及去棕榈酰化修饰酶PPT2,He La细胞的愈合速率及穿膜数量均明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;通过Transwell侵袭实验,结果显示过表达突变体C80A及去棕榈酰化修饰酶PPT2,He La细胞的穿膜数量明显增加,与对照组相比,差异有统计学意义（P<0.05）;结果表明Cofilin1的棕榈酰化修饰水平降低能明显促进He La细胞的迁移和侵袭。结论Cofilin1是棕榈酰化修饰蛋白,其棕榈酰化修饰位点为Cys39,Cys80,Cys139,Cys147;ZDHHC4,ZDHHC5,ZDHHC6是Cofilin1的棕榈酰化修饰酶;PPT2是Cofilin1的去棕榈酰化修饰酶;Cofilin1棕榈酰化修饰具有调控宫颈癌He La细胞迁移和侵袭的能力。