论文部分内容阅读
杀菌渗透增强蛋白(Bactericidal permeability increasing protein，BPI)是一种有很强抗革兰阴性菌(GNB)活性的阳离子蛋白，具有防御感染的作用。BPI最早从人中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒分离。BPI抑制或者杀死革兰阴性菌主要通过以下两条途径：（1）与细菌细胞壁上脂多糖的脂质A特异结合，从而改变细胞壁的通透性；（2）中和细菌内毒素。在正常情况下，小鼠睾丸与附睾被检测到高水平的BPI表达，提示BPI除了抗菌作用外，亦有可能在生殖活动中扮演某种角色。本研究旨在揭示BPI在小鼠睾丸与附睾的表达特性。利用制备的抗BPI-C多克隆抗体，重点观察BPI在附睾表达的区域特异性。在了解BPI表达规律的基础上，进一步探讨其表达的调控机制，及其在生殖活动中的可能作用。 首先，RT-PCR发现BPI的 mRNA在小鼠睾丸与附睾呈高水平表达，并且，BPI的转录子(transcripts)在附睾中只表达于附睾头部，而在前列腺、精囊腺和凝固腺未见表达。其次，我们经原核重组表达、亲和层析纯化了BPI-C端蛋白，并获得抗BPI-C兔多克隆抗体。以该抗体为一抗，经免疫免疫荧光化学法染色后发现，BPI表达在睾丸晚期生精细胞、精子、间质细胞(Leydig cells)、附睾头部上皮及管腔、睾丸输出小管，并可附着在附睾精子头部顶体区质膜及顶体内。雄激素调控BPI表达的体内、外实验结果显示，BPI的转录与翻译表达水平都与雄激素具有显著相关性。最后，我们进行了小鼠体外穿卵实验，结果提示小鼠精子顶体内的BPI可能直接或间接参与了精卵融合。以上研究结果为阐明BPI在男性生殖与精卵融合中所起的作用提供了一定的理论基础。