【摘 要】
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热带臭虫Cimex hemipterus（F.）隶属半翅目Hemiptera臭虫科Cimicidae,是吸食人血的无翅昆虫,它与温带臭虫C.lectularius L.因形态相似,被统称为臭虫,是重要的卫生害虫。热带臭虫在我国珠三角地区危害严重,因为抗药性的产生导致用药难以消除。针对臭虫抗药性问题,开展热带臭虫抗性机理研究刻不容缓,尤其是对常用的拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性机理研究尤为重要。因此,本学
【基金项目】
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江西省双千人才项目（G202000222010）; 国家外国专家项目（G20200222010,G2021022002）
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热带臭虫Cimex hemipterus（F.）隶属半翅目Hemiptera臭虫科Cimicidae,是吸食人血的无翅昆虫,它与温带臭虫C.lectularius L.因形态相似,被统称为臭虫,是重要的卫生害虫。热带臭虫在我国珠三角地区危害严重,因为抗药性的产生导致用药难以消除。针对臭虫抗药性问题,开展热带臭虫抗性机理研究刻不容缓,尤其是对常用的拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性机理研究尤为重要。因此,本学位论文旨在全国范围内进行臭虫样本的采集,主要以热带臭虫为研究对象进行了实验,研究结果如下:1.对深圳采集的热带臭虫野外种群进行转录组测序,进一步从热带臭虫转录组中筛选与击倒抗性基因（kdr）位点相关的钠离子通道全长基因（VGSC）。转录组测序数据质控后获得5.49 Gb数据,组装后获得21 619个unigenes,总长度为29 322 540bp,平均长度为1 356 bp。将unigenes序列分别与非冗余蛋白数据库（NR）、基因本体论（GO）、京都基因和基因组百科全书（KEGG）、直系同源蛋白分组比对数据库（egg NOG）和注释蛋白数据库（Swiss-Prot）进行比对和功能注释,得到45 362个有功能注释的unigenes,预测发现10 906条编码区序列,检测到7 754个简单重复序列（SSR）位点信息和33 144个SNP位点信息,并获得8个VGSCα基因,其中4个基因具有全长序列。2.利用分子克隆技术获得热带臭虫野外抗性种群的钠离子通道蛋白全长基因序列,测定该基因在热带臭虫不同发育时期的表达模式。结果获得长度为6 360 bp的热带臭虫钠离子通道基因（Chemi Nav）c DNA全长序列,其中开放阅读框（ORF）序列长度为5 931 bp共编码编码1 976个氨基酸,该蛋白分子量为223.2 k Da,等电点为5.42。Chemi Nav在3龄若虫中表达量最高,在雄成虫时期的表达量最低,在卵期无表达。鉴定了热带臭虫钠离子通道ORF序列的典型特征:有四个跨膜区域（I～IV）,每个跨膜区域由6个结构域（S1～S6）组成。并在ⅡS4和ⅡS6处发现了kdr突变位点。系统进化分析结果表明热带臭虫钠离子通道基因和温带臭虫钠离子通道基因亲缘关系最近,并与其他臭虫科昆虫钠离子通道基因聚为一支,各类群间聚类清晰。3.最后采用点滴法生物测定、区分剂量快速抗性鉴定方法和PCR检测kdr突变频率这三种方法对kdr突变的产生与臭虫对高效氯氰菊酯敏感的关系进行探究。点滴法结果表明5种杀虫剂对温带臭虫的毒性依次为吡虫啉和呋虫胺＞噻虫嗪＞氯虫苯甲酰胺和高效氯氰菊酯,测试的野外温带臭虫种群仅对噻虫嗪无明显抗性。热带臭虫两个野外种群对高效氯氰菊酯的抗性均远高于温带臭虫。检测的10个野外臭虫种群中全部发生了kdr位点突变,鉴定出4个突变位点。温带臭虫的4个地理种群可分为三种突变类型（A:无突变位点;B:只有L925I;C:同时有L925I和V419L）。热带臭虫的7个种群只有一种D类型:均出现M918I和L1014F这两个突变位点。突变位点存在与臭虫对高效氯氰菊酯敏感密切关联,kdr基因突变检测结果显示我国臭虫种群（Cimex spp.）广泛存在对拟除虫菊酯的抗性。
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