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神经酰胺 (Ceramide)即N-脂酰鞘氨醇(N-actyl-sphingosine),是体内的重要生物活性物质,也是细胞凋亡中一个常见的第二信使分子。近年来的研究表明神经酰胺与消化道肿瘤的发生、发展密切相关。本课题旨在以SAPK/JNK和ERK信号通路为中心,结合Bcl-2蛋白家族以及p53、Fas蛋白和细胞DNA损伤对凋亡的影响等方面,进一步探讨外源性神经酰胺诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的作用及其分子机理。
采用光镜直接观察和AO/EB染色法观察到外源性C<,2>-神经酰胺能够直接诱导体外培养的人结肠癌HT-29细胞发生不同程度的凋亡,且随着C<,2>-Cer剂量的增加,各处理组HT-29细胞的凋亡率和膜受损率也增加,存在剂量-效应关系。
Western Blotting分析结果显示C<,2>-神经酰胺能够降低ERK1、ERK2总蛋白的表达,对SAPK/JNK的活性则没有影响,提示C<,2>-神经酰胺能够通过抑制ERK信号转导通路诱导细胞发生凋亡,对SAPK/JNK信号转导通路可能没有影响;对Bcl-2蛋白家族研究显示C<,2>-神经酰胺能影响Bcl-2、Bax和Bak蛋白的表达,降低Bcl-2/Bax蛋白表达比值;C<,2>-神经酰胺能下调突变型p53蛋白的表达,上调Fas蛋白的表达,抑制HT-29细胞中的Fas抵抗效应;SCGE分析结果表明C<,2>-神经酰胺诱导HT-29细胞DNA损伤,存在剂量-效应关系。以上研究显示SAPK/JNK可能没有参与神经酰胺诱导的HT-29细胞凋亡,神经酰胺能够通过抑制ERK信号转导通路、影响Bcl-2蛋白家族、p53和Fas蛋白的表达诱导人结肠癌细胞凋亡;神经酰胺能够诱导人结肠癌细胞的DNA损伤。
通过本课题的研究,完善了外源性神经酰胺抑制结肠癌作用的分子机制,进而为今后研究神经酰胺类药物即将其应用于结肠癌的预防和治疗提供实验基础。