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目的:肝纤维化是一种发生在肝脏、循序而渐进的病理损伤,随着肝纤维化研究的不断深入,发现肝纤维化过程中炎症反应始终贯穿始终。P2x7受体(purinergic receptor,P2x7R)属于嘌呤受体家族,是P2x家族的7个不同亚型(P2x1-7)中的一种。它在人体中分布广泛,特别是与炎症反应过程直接相关。因而是否可以通过影响P2x7R来实现对酒精性脂肪肝的调控,摸索其中的潜在联系与机制,是我们要探究的问题。方法:(1)脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)预处理巨噬细胞的培养基间接刺激人系肝星状细胞株LX2细胞与直接LPS刺激LX2细胞的组别相比较,ELISA与 Western Blot 检测细胞因子白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β),白介素-1α(Interleukin-1α,IL-1α)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)表达情况。Western Blot与RT-PCR检测蛋白与mRNA的表达水平;LX2细胞给予LPS刺激4h,加入三磷酸腺苷(adenosine-triphosphate,ATP)时间为30min,加入 ATP 前 1Omin 给予 P2x7R 拮抗剂 A438079。Western Blot 与 RT-PCR 验证LX2细胞激活过程中炎症因子P2x7R、NOD样受体家族成员(NLRs)NLRP3和半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 1(cysteinyl aspartate specificproteinas,caspase-1)表达。同时检测肝纤维化标志蛋白Ⅰ型胶原(type Ⅰ collagen,collagen I)和平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白mRNA表达情况;沉默P2x7R后检测相关炎症小体与肝纤维化相关基因的表达。(2)建立硫代乙酰胺(Thioacetamide,TAA)肝纤维化模型,采用C57BL/6小鼠随机分为3组:正常组(n=5),模型TAA组(n=14)与模型TAA给药A438079组(n=5)。除正常组,第一周腹腔注射给予TAA(100 mg/kg)给药,从第二周到第六周内TAA(200 mg/kg),从第5周起给药组每周给予A438079(30mg/kg)3次,持续两周。第6周给药结束后处死,收取血清,肝脏等样本。苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)、免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)、麻松三色染色(Masson’s Trichrome Staining)、免疫荧光染色(Immunofluorescence Staining,IF)检测炎症相关因子 NLRP3、核转录因子(Nuclear factor kB,NF-kB)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和F4/80的表达情况。结合Western Blot与RT-PCR检测肝纤维化相关标志collagenI、α-SMA的表达。(3)对小鼠肝脏细胞(AML12)给予酒精(50mM)、二甲双胍与AMP依赖的蛋白激酶(AMP dependent kinase,AMPK)通路抑制剂 Compound C 刺激 24h,利用 Wertern Blot检测炎症因子与脂肪代谢相关沉默信息调节因子(Sirtuin1,SIRT1)、过氧化物增殖剂激活受体(PeroxisomeproliferatoractivatedReceptor-alpha,PPARα)蛋白表达结果,凋亡相关因子半胱天冬酶3,即caspase-3表达情况。(4)慢性酒精加急性酒精灌胃模型,采用C57BL/6小鼠随机分为4组:对照饲料组,慢性酒精加酒精急性灌胃组,酒精给药组以及单独给药组。给药组每天皮下注射给药A438079(30mg/kg)。实验阶段,分别给予对照饲料与酒精饲料10天喂养。第11天单次酒精灌胃的计量为5g/kg,9小时后处死并收集样本。利用Western Blot与RT-PCR检测炎症因子与肝纤维化标志因子的蛋白与mRNA表达情况,对肝脏病理切片进行染色分析肝纤维化与炎症因子浸润情况。结果:(1)LX2细胞经过LPS刺激后分泌IL-1β和IL-1α。LX2细胞经过LPS与ATP联合作用,肝纤维化相关各项指标collagen I、α-SMA以及P2x7R和caspase-1、NLRP3炎症小体的mRNA与蛋白表达升高;预处理P2x7R拮抗剂A438079可以有效降低上述因子的表达。(2)TAA所致的肝纤维化模型中,A438079可以在体内降低TAA引起的caspase-1、NLRP3炎症小体与纤维化指标标collagen I、α-SMA和TIMP 1的蛋白与mRNA表达,在病理学上改善模型组的病变情况。(3)在AML12细胞中,A438079可以有效降低酒精诱发的PPARα、caspase-3、P-AMPK、SIRT 1的蛋白表达。(4)慢性加急性酒精灌胃模型中,P2x7R拮抗剂A438079可以降低酒精诱发的ALT/AST指标升高,在病理学上改善模型组的病变情况以及collagen I、α-SMA、P-AMPK、SIRT1、LIPIN 1的蛋白表达。结论:P2x7R介导的NLRP3炎症小体激活可以促使IL-1β分泌,间接促进肝纤维化的发生发展,在肝脏中调节酒精性脂肪肝进程。说明P2x7R在肝纤维化和酒精性脂肪肝治疗过程中会是一个有效的研究靶点。