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目的:本实验在中药引经理论的指导下,结合课题组前期对桔梗引经作用的研究成果,以桔梗及其单体α-菠菜甾醇为研究药物,利用Cocktail探针药物法、实时荧光定量PCR、免疫蛋白印迹、免疫组化等研究方法,研究了桔梗及α-菠菜甾醇不同剂量组对SD大鼠肺、肝、肾组织中药物代谢酶5种亚型的mRNA表达量、酶蛋白表达量、酶活力以及调控代谢酶的核受体PXR、CAR、AhR mRNA表达量、蛋白表达量的影响,和对肺、肝、肾组织中外排型转运体P-pg和摄取型转运体OAPT和PEPT2mRNA和蛋白表达量的影响,以及初步研究了桔梗及α-菠菜甾醇对大鼠肺组织MicroRNA的表达谱。通过以上研究,探索在分布、代谢和排泄环节上桔梗及α-菠菜甾醇“载药上行”的作用机理。方法:(1)SD大鼠(180 g±20 g),雄性,随机分为6个组。分别为空白对照组,桔梗低、中、高剂量组(2.5 g/kg、5 g/kg、10 g/kg),α-菠菜甾醇低、高剂量组(5 mg/kg、15 mg/kg)。大鼠适应性饲养一周后,每组进行灌胃给药,中药组分别给予水煎的三个剂量中药,单体组给予两个剂量α-菠菜甾醇,空白组给予等体积的生理盐水。实验期间大鼠正常饮食饮水。各组大鼠连续给药7 d,给药第6 d后让大鼠正常饮水,禁食。各组大鼠末次给药后2 h,乙醚麻醉,抽取血液,脱颈处理后,采集肝、肺、肾组织样品用生理盐水进行清洗,解剖与取样全过程用消毒手术剪工作,防止体温对样品成分降解,对样品进行标记、保存与分装,不需要及时处理的样品,立即冻存于-80℃冰箱备用。采用Cocktail探针药物法、实时荧光定量PCR、免疫蛋白印迹、免疫组化等方法测定大鼠肺、肝、肾组织样品中药物代谢酶、核受体、药物转运体的变化;(2)SD大鼠(180 g±20 g),雄性,随机分为3个组。分别为空白对照组,桔梗组(10 g/kg),α-菠菜甾醇组(15 mg/kg)。使用安诺优达miRNA测序分析产品,采用Illumina高通量测序技术,初步研究桔梗及α-菠菜甾醇对大鼠肺组织MicroRNA的表达谱。结果:(1)桔梗及其单体α-菠菜甾醇提高了肝、肾CYP1A2、CYP2E1、CYP2C11、CYP2D6、CYP3A1这5种药物代谢酶亚型的mRNA表达量、蛋白含量和酶活力。(2)桔梗及其单体α-菠菜甾醇提高了RXR、CAR、AhR三种核受体mRNA表达量和蛋白含量。(3)桔梗及其单体α-菠菜甾醇抑制肺P-pg、肝OATP2、肾PEPT2的mRNA表达和蛋白表达量,促进肺PEPT2、肝肾P-pg的mRNA表达和蛋白表达量。(4)桔梗及其单体α-菠菜甾醇作用机体后,通过对肺差异表达miRNA的分析,预测到1个靶基因:ENSRNOG00000033101。结论:(1)桔梗及α-菠菜甾醇通过对中下焦肝、肾组织药物代谢酶5种亚型CYP1A2、CYP2E1、CYP2C11、CYP2D6和CYP3A1 mRNA、蛋白表达的诱导作用和体外酶活力的上调作用,可使药物在下焦肝、肾的药物代谢加快,肝、肾组织药物浓度降低,是其发挥“引经”作用的机制之一;(2)桔梗及α-菠菜甾醇主要通过诱导肝、肾PXR、CAR、AhR mRNA和蛋白的表达,从而引起下游CYP450s靶基因和蛋白表达的变化,上调下焦肝肾CYP450s mRNA和蛋白的表达;(3)桔梗及α-菠菜甾醇下调肺组织P-pg、肝组织OATP2、肾组织PEPT2 mRNA和蛋白的表达,上调肺PEPT2、肝肾组织P-gp mRNA和蛋白的表达,是其发挥“引经”作用的机制之一。