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目的本课题观察知母总皂苷对于Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响作用以及观察其中凋亡相关基因BAX和BCL-2mRNA及其蛋白表达的变化并探讨其机制。进一步揭示了阿尔茨海默病的发生机制,为临床治疗阿尔茨海默病提供实验依据。方法培养PC12细胞,采用10、20、30、40p MA β25-35分别刺激PC12细胞24、36、48、72h,通过MTT法测定出最佳的刺激浓度为20μM和时间为48h用于后期的实验。通过MTT法检测,选出合适的知母总皂苷的浓度5,10,20mg/L和西药(盐酸多奈哌齐)浓度1μM。实验分组：正常组、模型组、5知母组(5mg/L知母总皂苷)、10知母组(10mg/L知母总皂苷)、20知母组(20mg/L知母总皂苷)、西药组。通过倒置相差显微镜观察各组细胞的形态和成长情况；并用MTT比色法检测各组细胞的活力；用流式细胞仪检测各组PC12细胞的凋亡率：采用Annexin V-EGFP/PI双染色后用荧光显微镜观察各组细胞凋亡的情况并拍照：采用免疫组织化学检测细胞中BAX和BCL-2蛋白表达的情况；用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组中PC12细胞BAX和BCL-2mRNA的表达水平：采用western blotting技术检测组中PC12细胞BAX和BCL-2蛋白的表达水平。结果1、Aβ25-35诱导PC12细胞后,细胞活力下降,且与Aβ25-35的剂量和作用时间有密切关系,当作用时间为48h时,各浓度均达到最大抑制率,而且10μM、20μM、30μM和40μM的Aβ25-35均和正常组有显著性差异。且20μM和30μM对于细胞影响没有显著性差异。最终选择20μMAβ25-35作用PC12细胞48h,可制成理想的AD细胞模型。2、用0.5、5、10、20、40mg/L的知母总皂苷或1、10μM的盐酸多奈哌齐和20μM的Aβ25-35一起作用PC12细胞48h,通过MTT法检测,结果证明当知母总皂苷浓度在5、10、20mg/l或者是1μM的盐酸多奈哌齐和模型组有显著性差异(p<0.01),当浓度为40mg/L时,细胞活力下降。3、通过MTT比色法、流式细胞学以及荧光双染色法测定,5、10、20mg/L的知母总皂苷以及1μM的盐酸多奈哌齐均能降低Aβ25-35对于PC12细胞的毒性作用,和模型组有显著性差异(p<0.05或p<0.01)。4、RT-PCR、免疫组化和western blotting均证明了,5、10mg/L的知母总皂苷以及]μM的盐酸多奈哌齐能显著降低凋亡基因BAX mRNA以及BAX蛋白的表达水平,和模型组有显著性差异(p<0.05或p<0.01)。5、RT-PCR、免疫组化和western blotting均证明了,5、10、20mg/L的知母总皂苷以及1μM的盐酸多奈哌齐能显著升高抗凋亡基因BCL-2mRNA以及BCL-2蛋白的表达水平和正常组有显著性差异(p<0.05或p<0.01)。浓度为5、10mg/L时效果最好,和西药组没有显著性差异。结论1、知母总皂苷能改善Aβ25-35对PC12细胞细胞活力的影响,降低Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡率。2、知母总皂苷能降低Aβ25-35诱导PC12细胞BAXmRNA以及BAX蛋白的表达水平,升高BCL-2mRNA以及BCL-2蛋白的表达水平。