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本文主要从以下几方面进行论述: 第一部分 HDAC在IFN-γ诱导的胃癌B7-H1表达中的调控作用及机制 目的:探讨胃癌中组蛋白去乙酰化酶(HDAC)对IFN-γ诱导的B7-H1表达的调控作用及机制。 方法:使用TCGA数据库中胃癌样本RNA-seq数据,分析B7-H1和HDAC表达及相关情况;通过RT-qPCR、western blot检测临床胃癌和癌旁组织标本B7-H1和HDAC表达;HDAC抑制剂(TSA、SAHA、Butyrate)处理胃癌HGC27细胞后,或siRNA敲低HADC基因后,通过RT-qPCR、western blot、流式细胞术检测对IFN-γ诱导的B7-H1表达的影响,通过western blot检测IFN-γ信号通路组分JAK1、JAK2、STAT1的磷酸化形式和总蛋白表达情况,免疫荧光检测STAT1核转位;ChIP-qPCR检测SAHA处理对IFN-γ诱导的B7-H1基因启动子区域Ac-H3K9水平升高的影响;建立小鼠皮下移植胃癌模型,随机分为SAHA处理组或溶剂处理组,记录瘤体生长曲线,流式细胞术检测瘤体B7-H1表达和CD8+T淋巴细胞浸润情况,比较两组差异。 结果:基于TCGA数据库,在34例正常胃粘膜组织和415例胃癌组织中,B7-H1、HDAC1、HDAC2和HDAC3在胃癌组织中的表达均较正常胃粘膜组织增高;B7-H1与HDAC3和HDAC1表达呈正相关。12例临床胃癌和癌旁组织标本的检测显示B7-H1和HDAC3的表达在胃癌组织中较癌旁组织增高。TSA、SAHA或butyra te预处理,HDAC1和HDAC3基因敲低均显著降低了IFN-γ诱导HCG27细胞表达B7-H1的水平,同时降低了IFN-γ信号通路组分JAK2、p-JAK1、p-JAK2和p-STAT1表达水平以及STAT1核转位水平。SAHA处理抑制了IFN-γ诱导的B7-H1基因启动子区域Ac-H3K9水平升高。小鼠胃癌移植瘤模型中,SAHA处理组较对照组瘤体生长减慢,肿瘤细胞B7-H1表达下降,肿瘤浸润CD8+T淋巴细胞百分比上升。 结论:HDAC通过参与维持IFN-γ信号通路关键组分JAK2的表达,实现对胃癌IFN-γ信号通路活化的促进作用和对B7-H1表达的调控。HDAC抑制剂是一种有希望的靶向抑制B7-H1的小分子药物。 第二部分 肿瘤细胞B7-H1表达与胃癌预后关系的meta分析 目的:利用循证医学方法定量、系统、全面地评价胃癌中B7-H1表达与预后的关系,为临床判断患者预后及治疗提供依据。 方法:以胃癌(gastric cancer)、B7-H1、免疫组化(immunohistochemistry)、预后(prognosis)为关键词系统检索PubMed、Embase、Web of Science和Cochrane Library数据库,收集胃癌细胞B7-H1表达与总体生存率(overall survival,OS)关系的相关文献。对按照标准纳入的研究以风险比(hazard ratio,HR)及其95%可信区间(95%CI)为效应量进行合并,计算总的HR和95%CI。按照肿瘤TNM分期、地区、EBV感染情况进行亚组分析。 结果:本分析共纳入23项研究,包含5037例胃癌病人。分析表明:胃癌细胞B7-H1表达与总体生存显著相关,HR值为1.40,95%CI为1.14-1.72。在亚组分析中,肿瘤TNM分期为Ⅰ-Ⅳ、Ⅰ-Ⅲ或亚洲地区胃癌病例中B7-H1表达与预后相关,HR及95%CI分别为1.31(1.04-1.65)、2.15(1.37-3.37)、1.42(1.15-1.74);分期为Ⅱ-Ⅲ期、西方国家、EBV阳性、EBV阴性亚组中B7-H1表达与预后不相关,HR及95%CI分别为1.70(0.98-2.94)、2.15(0.22-20.98)、0.91(0.31-2.66)、1.27(0.83-1.96)。 结论:胃癌细胞B7-H1表达与胃癌预后不良相关,为胃癌预后的预测以及针对B7-H1的免疫检查点抑制剂治疗提供了依据。