灰树花优良菌株的筛选及其液态发酵特性研究

来源 :河南工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:atang2010
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本课题从收集到的、现大规模种植的5株灰树花试验菌株出发,以灰树花液态发酵产多糖性能为指标,筛选出一株较适合液态发酵的灰树花优良菌株,并对其液态发酵的条件及特性进行了研究。采用拮抗试验和过氧化氢酶同工酶试验相结合对试验菌株的亲缘关系进行鉴定。拮抗试验结果表明,各试验菌株两两组合的平板中间均出现了拮抗线,初步说明它们是不同的菌株。过氧化氢酶同工酶试验表明,不同菌株过氧化氢酶同工酶酶谱类型上表现出了一定的差异性,并且没有完全相同的酶谱类型;在不同的Rf值处共可检测到3条明显的谱带,其迁移率分别为RfE1 = 0.214、RfE2 = 0.576、RfE3 = 0.782,其中,菌株Gf-2在RfE2处缺失一条谱带、菌株Gf-5在RfE3处缺失一条谱带,与其它菌株差异较大,说明菌株Gf-2和Gf-5与其它试验菌株的亲缘关系较远。固体平板培养比较试验表明,菌株Gf-5表现出了较快的菌丝长速和良好的菌丝长势,菌株Gf-1、Gf-3及Gf-4稍差,而菌株Gf-2最差。耐高温比较试验表明,菌株Gf-2和Gf-5在经高温处理后能迅速萌发出新的菌丝,说明菌株Gf-2与Gf-5比较耐高温。而液态发酵产多糖性能的比较试验表明,菌株Gf-3的菌球直径最小、菌丝生物量最高,其胞外多糖、胞内多糖及总多糖产量分别达11.07 mg/100mL、28.68 mg/100mL和39.75 mg/100mL,均高于其它菌株,说明菌株Gf-3较适合于液态发酵生产。继而,通过出菇试验对筛选菌株Gf-3的品质进行了验证,同时也达到对其进行菌种鉴定的目的。筛选菌株Gf-3的液态发酵培养基的优化试验结果表明,葡萄糖和蛋白胨分别是其液态发酵的最佳碳源和氮源,并且响应面法表明葡萄糖浓度34.62g/L、蛋白胨浓度2.59g/L较适合其液态发酵培养。液态发酵培养条件的优化试验结果表明,起始pH 6.0、500mL三角瓶装液100~150mL,按10%(V/V)的接种量接入培养7d左右的种子液,于26℃、150~200r/min恒温振荡培养6d即可结束发酵。筛选菌株Gf-3的发酵罐液态培养结果表明,在发酵的前48h内为迟滞期,48~132h为快速生长期,132~168h为稳定期,发酵168h后为衰亡期。在整个发酵过程中,pH值是一个逐步下降的过程,菌丝生物量和胞外多糖则是逐步积累的过程,并且胞外多糖的合成与菌体生长属于生长偶联型,在液态发酵稳定期的后期、亦即菌体自溶之前应结束发酵。
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