目的:分析急性肾损伤慢性化病变过程中足细胞损伤与补体C3激活之间的关系,探讨补体C3在AKI后慢性化过程中对足细胞损伤的影响及可能机制,为防治AKI后肾脏慢性化提供新思路。方法:1.50只野生型BALB/C小鼠随机分为:空白对照组（Control）、假手术组（sham）、AKI 20组（左侧肾动脉夹闭20min恢复血流）、AKI 30组（左侧肾动脉夹闭30min恢复血流）和AKI 40组（左侧肾动脉夹闭40min恢复血流）,并于第8d切除右侧肾脏。分别于第8、9、10、14、28d收集小鼠24h尿,眼内眦静脉丛取血,检测24h尿蛋白、血肌酐（serum creatinine,Scr）、血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）;第28d颈椎脱臼法处死小鼠获取肾脏标本。HE染色和Masson染色进行病理损害分级及评分;电镜观察肾组织足细胞病理改变。q-PCR、Western Blot和免疫组化法检测Nephrin、CD2AP、Synaptopodin和TRPC6mRNA及蛋白表达。2.30只野生型BALB/C小鼠随机分为3组:空白对照组（WT-Control）、假手术组（WT-sham）、AKI后慢性化组（WT-AKI-CKD,左侧肾动脉夹闭30min恢复血流）;30只补体C3基因敲除(C3^-/-)小鼠随机分为3组:对照组(C3^-/--Control)、假手术组(C3^-/--sham)、AKI后慢性化组(C3^-/--AKI-CKD,左侧肾动脉夹闭30min恢复血流)。各假手术组及AKI-CKD组于第8d切除右侧肾脏。第28d收集小鼠24h尿,眼内眦静脉丛取血,检测24h尿蛋白、Scr和BUN;颈椎脱臼法处死小鼠获取肾脏标本。HE染色和Masson染色进行病理损害分级及评分;电镜观察肾组织足细胞病理改变。ELISA测肾组织IL1、IL6、TGF-β1含量。q-PCR、Western Blot和免疫组化法测Nephrin、CD2AP、Synaptopodin、TRPC6、补体C3、LXRα、TLR4 mRNA及蛋白表达。3.体外培养小鼠肾小球足细胞;采用持续通氮气法建立足细胞缺氧环境;分别给予不同浓度C3a干预,并给予TLR4抑制剂（HCQ）共培养,通过AB法转导足细胞LXRα-SiRNA及脂质体法转导质粒LXRαDNA载体。HE染色观察足细胞形态;ELISA法测足细胞上清液IL1、IL6、TGF-β1;q-PCR技术检测足细胞LXRαmRNA表达;Western Blot检测肾足细胞LXRα、TLR4、Synaptopodin、Nephrin、CD2AP、TRPC6蛋白表达。结果:1、与Control组相比,第9d AKI 20组、AKI 30组和AKI 40组Scr、BUN均显著升高（P<0.05）。与第9d相比,第10d三组Scr、BUN水平均降低（P<0.05）。第14d AKI 30组和AKI 40组Scr、BUN均显著升高（P<0.05）,而AKI 20组、Control组和Sham组三组之间Scr、BUN水平均无统计学差异（P>0.05）。第28d AKI 30组和AKI 40组Scr、BUN均继续升高（P<0.05）,但两组间Scr、BUN无明显差异（P>0.05）;第9d,AKI 40组尿蛋白显著升高（P<0.05）,第10d AKI40组尿蛋白较第9d开始下降（P<0.05）,第14d和28d AKI 40组尿蛋白与Control组相比无明显差异（P>0.05）。第14d AKI 30组尿蛋白显著升高（P<0.05）,第28d AKI 30组尿蛋白进一步增加（P<0.05）,而AKI 20组尿蛋白与Control组、Sham组相比均无明显差异（P>0.05）。HE染色显示肾组织纤维化呈缺血时间依赖性加重。AKI 20组肾小球系膜增生、肾小球硬化及肾小管间质评分与Control组和Sham组之间无明显差异（P>0.05）。AKI 30组三方面损伤均加重（P<0.05）;AKI 40组肾小管间质评分与AKI 30组相比,有统计学明显差异（P<0.05）。Masson染色显示肾小球、肾小管及肾间质胶原面积呈缺血时间依赖性增高。透射电镜显示:AKI 20组、Control组与Sham组足细胞完整,结构清晰,未见足突融合;AKI 30组足细胞广泛的足突融合;AKI 40组广泛足细胞足突节段剥离,GBM裸露。Synaptopodin、Nephrin、CD2AP的mRNA及蛋白表达呈缺血时间依赖性降低,TRPC6 mRNA及蛋白表达呈缺血时间依赖性升高。与Control组相比,AKI 30组Synaptopodin、Nephrin、CD2AP的mRNA和蛋白表达水平均显著减少（P<0.01）,TRPC6 mRNA和蛋白表达水平均显著增加（P<0.01）。与AKI 30组相比,AKI 40组Synaptopodin、Nephrin、CD2AP的mRNA和蛋白表达水平显著减少（P<0.05）,TRPC6 mRNA和蛋白表达水平显著升高（P<0.05）。AKI 20组、Sham组与Control组之间上述指标均无统计学差异（P>0.05）。2、与WT-AKI-CKD组相比,C3^-/--AKI-CKD组Scr、BUN和尿蛋白水平均显著降低（P<0.05）;肾小球系膜增生、肾小球硬化及肾小管间质评分均显著降低（P<0.05）;肾小球、肾小管及肾间质胶原面积均降低（P<0.05）;透射电镜显示:WT-Control组、WT-sham组、C3^-/--Control组和C3^-/--sham组足细胞完整、结构清晰、未见足突融合,WT-AKI-CKD组可见足细胞广泛的足突融合,C3^-/--AKI-CKD组局部可见足细胞足突融合;与WT-AKI-CKD组相比,C3^-/--AKI-CKD组IL1、IL6、TGF-β1浓度水平均显著降低（P<0.05）;补体C3、TRPC6、LXRα、TLR4 mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）,Syn-aptopodin、Nephrin、CD2AP mRNA和蛋白表达水平均显著增加（P<0.05）。3、与Control组相比,足细胞上清液IL1、IL6及TGF-β1含量呈C3a浓度依赖性显著增加（P<0.05）;与Control相比,C3a组TLR4及LXRα水平均显著增加（P<0.01）,Synaptopodin、Nephrin、CD2AP蛋白表达水平均显著降低,TRPC6蛋白表达水平显著增加（P<0.01）;与C3a组相比,C3a+HCQ组足细胞IL1、IL6及TGF-β1水平均显著降低（P<0.01）,TLR4、TRPC6蛋白表达均显著降低,Synaptopodin、Nephrin、CD2AP蛋白表达显著增加（P<0.01）,LXRα蛋白表达无统计学差异（P>0.01）;与C3a+Scrambled-SiRNA组相比,C3a+LXRα-SiRNA组足细胞上清液IL1、IL6及TGF-β1含量均明显增高（P<0.01）,与Scrambled-SiRNA组相比,LXRα-SiRNA 12.5 nM组及25 nM组转染后足细胞LXRαmRNA及蛋白表达水平均显著降低（P<0.01）,25nM组较12.5nM组足细胞LXRαmRNA及蛋白水平均明显减少（P<0.05）,LXRα-SiRNA+C3a（0.1μM）组TLR4、TRPC6蛋白表达水平均显著增加（P<0.05）,Synaptopodin、Nephrin、CD2AP蛋白表达显著降低（P<0.05）;转染LXRα质粒足细胞LXRαmRNA及蛋白表达水平均显著高于空载质粒组（P<0.01）,与空载质粒组相比,C3a（0.1μM）+LXRα质粒组足细胞上清液IL1、IL6及TGF-β1含量均显著降低（P<0.01）,TLR4、TRPC6蛋白表达水平显著降低,Synaptopodin、Nephrin、CD2AP蛋白表达水平显著增加（P<0.05）。结论:1、小鼠AKI后慢性化过程中伴有足细胞损伤。2、小鼠AKI后慢性化过程中补体C3被激活;补体C3基因敲除可改善小鼠AKI后慢性化过程中肾组织炎症反应和足细胞损伤,减轻肾脏纤维化。3、补体C3a在缺氧条件下可促进足细胞炎症反应和LXRα/TLR4表达,下调LXRα/TLR4可减轻足细胞炎症反应与足细胞损伤。4、补体C3可能通过LXRα/TLR4调控足细胞损伤,并且是小鼠AKI后肾脏慢性纤维化的重要机制。