DEAE-dextran接枝琼脂糖介质的蛋白质吸附与洗脱行为研究

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利用二乙氨乙基葡聚糖(DEAE-dextran)和DEAE修饰琼脂糖介质Sepharose FF得到的两类接枝型离子交换介质(接枝链配基介质FF-DexD和混合配基介质FF-D-DexD)对牛血清白蛋白表现出较高的吸附容量和传质速率,这是由于接枝链配基DEAE-dextran提供了三维的吸附空间和“链传递”效应,同时表面配基DEAE在“链传递”效应的“中转站”作用会进一步加快传质。本文围绕影响DEAE-dextran接枝的琼脂糖离子交换介质吸附与洗脱性能的因素,开展了系统的研究。首先,针对环境因素对离子交换色谱性能的影响,研究了不同反离子存在下两种介质(FF-DexD100和FF-D50-DexD100)色谱行为的差异,并与3种商品化介质(Q Sepharose FF、Q Sepharose XL和DEAE Sepharose FF)的色谱行为进行对比。研究发现,含有离子交换配基DEAE的介质表现出相同的反离子偏好性序列,即这种偏好性差异只与配基的化学性质有关,而与配基的位置(表面配基或接枝链配基)无关。同时也发现,对于两种接枝介质,偏好性强的反离子虽有利于蛋白洗脱,但同时也会降低其吸附容量和传质速率,从而降低动态吸附容量。因此,需在色谱过程的不同操作流程中选择最适的反离子以优化分离效果,即在吸附操作中使用HPO42-,在洗脱操作中使用SCN-。之后,针对样品因素对离子交换色谱行为的影响,研究了两种分子尺寸和带电量均不同的蛋白质(BSA和γ-球蛋白)在四种不同离子交换容量(IC)的FF-DexD上的吸附行为的差异。研究发现,相比于商品化非接枝介质DEAE Sepharose FF,四种FF-DexD介质对两种蛋白(BSA和γ-球蛋白)均具有较高的吸附容量和传质速率。但由于γ-球蛋白分子尺寸较大,高接枝密度造成的孔径大幅度降低会阻碍γ-球蛋白进孔,从而降低吸附容量,同时由于吸附相蛋白减少会降低表面传质对总传质的贡献,且孔径的减小使蛋白质孔内传质阻力增大,造成传质速率的下降。本文的研究内容深化了对葡聚糖接枝离子交换介质色谱行为的认识,对于该类介质在实际生产中的应用具有重要的指导意义。
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