微生物代谢烟碱类杀虫剂噻虫啉和噻虫嗪的研究

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本文主要从快速降解烟碱类杀虫剂噻虫啉(Thiacloprid, THI)和噻虫嗪(Thiamethoxam, TMX)的土壤中分离和鉴定具有THI和TMX降解活性的微生物,对其降解条件、降解途径等进行了研究;并分析了降解TMX混合菌液中微生物的多样性。1、从快速降解THI的土壤中分离到两株细菌THI-A和THI-B,经16S rDNA序列BLAST分析,THI-A菌株鉴定为苍白杆菌Ochrobactrum sp., THI-B菌株鉴定为不动杆菌Acinetobacter sp, Genbank登录号分别为JF414756、 JN098518。Ochrobactrum sp. THI-A和Acinetobacter sp. THI-B可将THI转化成THI amide。土壤提取液不能促进Ochrobactrum sp.THI-A、 Acinetobacter sp.THI-B生长细胞转化THI,但可以促进Ochrobactrum sp.THI-A和Acinetobacter sp. THI-B静息细胞转化THI,转化活性分别提高2.5倍和1.5倍,48h可分别降解13.8%和6.6%的THI。2、以TMX为唯一碳源和氮源,采集自海南的土壤在矿物盐培养基中可快速降解TMX,涂布分离,从中挑取了31株细菌进行TMX降解能力测定,其中有11株细菌菌株可降解TMX,TMX-23号菌株的降解能力最高。经16S rDNA序列BLAST分析,TMX-23菌株鉴定为粘着剑菌Ensifer adhaerens, Genbank数据库中登录号为JN098520。转化产物经HPLC-MS分析显示,E. adhaerens TMX-23降解TMX的产物为作用于硝基亚胺基基团(=N-NO2)生成iitroso TMX(=N-NO)和urea TMX (=O). E. adhaerens TMX-23在矿物盐培养液中可降解TMX,15天可降解38.6%TMX,半衰期为8.2天,然而E.adhaerens TMX-23悬浮于磷酸盐缓冲液中(静息细胞)则不能降解TMX。葡萄糖可明显促进E.adhaerens TMX-23OD60o的增加,添加1%葡萄糖的实验组的生物量是未加葡萄糖对照组的8倍;然而葡萄糖却显著抑制了E. adhaerens TMX-23降解TMX,15天TMX的降解率仅为15.0%。这与文献报道的Leifsonia sp. PC-21、 Pseudomonas sp. Gl、 R.mucilaginosa IM-2和Stenorophomonas maltophilia CGMCC1.1788菌株以葡萄糖为共代谢基质促进烟碱类杀虫剂降解的共代谢方式截然相反。E. adhaerens TMX-23可在固氮培养基上生长,表明该菌株具有生物固氮能力。10mg/L的TMX可促进E.adhaerens TMX-23生物量的增加1.3倍。采用16S rDNA PCR-DGGE法分析可降解TMX混合菌液的微生物多样性,切胶回收的9个条带经PCR扩增和测序,blast分析表明其中条带5和条带6分别属于Achromobacter sp和E. adhaerens;其他7个条带均为未培养微生物。上述结果表明未培养微生物在TMX降解过程中可能起到重要作用。本论文为烟碱类杀虫剂污染等土壤修复提供微生物种质资源和科学依据,具有一定的理论意义和应用价值。
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