【摘 要】
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破骨细胞在骨稳态中主要负责吸收骨基质,而要成骨细胞主要负责形成骨基质,两者处于平衡中,当破骨细胞出现过度吸收骨基质时,破骨细胞与成骨细胞之间的平衡就会被打破平衡,进而导致骨质疏松症等多种骨代谢疾病。大血藤作为我国特有的中药材,化学成分丰富,具有强健筋骨、活血、止痛、清热解毒等功效。实验室前期研究发现,大血藤酚部位可抑制经1α,25-（OH）2Vit D3诱导原代分离兔骨髓间充质细胞获得的破骨细胞的
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破骨细胞在骨稳态中主要负责吸收骨基质,而要成骨细胞主要负责形成骨基质,两者处于平衡中,当破骨细胞出现过度吸收骨基质时,破骨细胞与成骨细胞之间的平衡就会被打破平衡,进而导致骨质疏松症等多种骨代谢疾病。大血藤作为我国特有的中药材,化学成分丰富,具有强健筋骨、活血、止痛、清热解毒等功效。实验室前期研究发现,大血藤酚部位可抑制经1α,25-（OH）2Vit D3诱导原代分离兔骨髓间充质细胞获得的破骨细胞的活性。因此,本论文旨在研究大血藤酚部位及成分羟基酪醇和原花青素B2对RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成破骨细胞及骨吸收活性的影响,并进一步研究对破骨细胞标志性基因TRAP、CTSK的调控作用。本论文主要工作如下:（1）将大血藤酚部位应用到由RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成破骨细胞模型和以Transwell小室构建的小鼠成骨-破骨细胞共培养诱生破骨细胞模型上,以MTT法确定大血藤酚部位对RAW264.7细胞存活率的影响;通过测定TRAP染色阳性细胞数、TRAP酶活力值以及骨吸收陷窝面积来评价大血藤酚部位对RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成的破骨细胞和小鼠成骨-破骨细胞共培养诱生的破骨细胞及骨吸收活性的影响。（2）进一步研究了大血藤酚部位成分羟基酪醇和原花青素B2对RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成对破骨细胞及骨吸收活性的影响。以MTT法确定羟基酪醇和原花青素B2对RAW264.7细胞存活率的影响;通过统计TRAP染色阳性细胞数、测定TRAP酶活力值以及骨吸收陷窝面积来评价羟基酪醇和原花青素B2对RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成破骨细胞及骨吸收活性的影响。（3）采用Real-time PCR和Western Blot方法研究大血藤酚部位及成分羟基酪醇和原花青素B2对RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成的破骨细胞标志性基因TRAP和CTSK m RNA和蛋白表达的影响。结果表明:（1）大血藤酚部位20μg/m L以下浓度对RAW264.7细胞没有毒性;大血藤酚部位对RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成的破骨细胞和小鼠成骨-破骨细胞共培养模型诱生的破骨细胞均有不同程度的抑制作用,均能有效地减少经TRAP染色破骨细胞的数量和大小、降低其TRAP酶活力和骨吸收陷窝面积,其中以大血藤酚部位高浓度组20μg/m L抑制作用最为明显,其次是10μg/m L、5μg/m L、2.5μg/m L,呈现出较为良好的浓度梯度依赖性。（2）羟基酪醇和原花青素B2 10μmol/m L以下浓度均对RAW264.7细胞没有毒性;羟基酪醇和原花青素B2对RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成的破骨细胞及骨吸收活性均有抑制作用,能有效减少经TRAP染色破骨细胞的数量和大小、降低TRAP酶活力和骨吸收陷窝面积,其中以羟基酪醇高浓度组10μmol/m L、原花青素B2高浓度组10μg/m L抑制作用最为明显,其次是1μmol/m L、0.1μmol/m L、0.01μmol/m L,也呈现出较为良好的浓度梯度依赖性。（3）大血藤酚部位及成分羟基酪醇和原花青素B2对RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成的破骨细胞的标志性基因TRAP和CTSK m RNA和蛋白表达均有下调作用。综上,大血藤酚部位及成分羟基酪醇和原花青素B2可抑制由RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成破骨细胞及骨吸收活性,并且可下调由RANKL诱导RAW264.7细胞分化形成的破骨细胞的标志性基因TRAP和CTSK m RNA和蛋白的表达。本研究在一定程度上为大血藤治疗与破骨细胞相关疾病提供了基础数据。
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