蛋鸡小肽载体PepT1mRNA表达及其调控机制的研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:a24287490
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本论文研究了小肽载体在蛋鸡肠道不同部位的表达特点,并探讨了不同蛋白源供应形式对蛋鸡消化道肽载体的影响,以及外源激素和生长因子对蛋鸡PepT1基因表达的调控作用。试验一研究探讨了蛋鸡肽转运载体PepT1mRNA表达的RT-PCR评定方法及蛋鸡肠道不同部位肽载体PepT1mRNA的表达形式、分布特点。根据肽载体cPepT1 mRNA和看家基因β-actin mRNA序列,分别设计cPepT1和β-actin引物各一对,通过温度、循环数等PCR条件的优化,建立包括RNA提取、反转录、PCR的蛋鸡小肠cPepT1基因检测方法,应用该方法研究蛋鸡cPepT1基因在小肠各段的表达差异。结果显示,蛋鸡空肠部位PepT1mRNA的表达水平显著高于十二指肠(p<0.05),与回肠比差异不显著(p>0.05),十二指肠PepT1mRNA的表达水平与回肠之间无显著差异(p>0.05)。试验二分别应用游离氨基酸、小肽(酪蛋白水解物)、酪蛋白为氮源,配制纯合日粮,饲喂蛋鸡,应用RT-PCR技术检测肠道转运载体PepT1mRNA表达量的变化,从而确定蛋白源形式对肽载体PepT1mRNA表达的影响大小和规律。结果表明:以小肽为氮源的试验组蛋鸡小肠不同肠段转运载体PepT1mRNA表达量较饲喂游离氨基酸和酪蛋白组明显提高(p<0.05),而游离氨基酸组和酪蛋白组间差异不显著(p>0.05)。试验三研究了外源激素和生长因子对蛋鸡PepT1mRNA表达的调控作用。成年蛋鸡42只,随机分为7组,分别接受表皮生长因子(EGF)、甲状腺素、胰岛素、胰高血糖素、肾上腺素受体激动剂、甲硫咪唑刺激,剂量分别为0.03mg/kg、330ug/kg、0.1mg/kg、0.1 mg/kg、0.03 mg/kg、25mg/kg,对照组注射蒸馏水,每日一次,连续5d,取小肠检测肠道肽转运载体表达量变化。结果表明:EGF对蛋鸡小肠PepT1 mRNA表达量有降低的趋势;皮下注射胰岛素、胰高血糖素、肾上腺素受体激动剂和口服甲状腺素后对蛋鸡十二指肠PepT1 mRNA表达量有上调的作用,其中胰岛素的上调作用最为明显;皮下注射胰岛素和口服甲状腺素对空肠和回肠PepT1 mRNA表达量有上调的趋势,其中以胰岛素的上调作用更为明显;皮下注射胰高血糖素、肾上腺素受体激动剂和口服甲硫咪唑对空肠和回肠PepT1 mRNA表达量有降低的趋势,但均未达到显著水平。
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