牛海绵状脑病俗称疯牛病，其主要症状是患牛精神状态失常、共济失调、感觉过敏和中枢神经系统灰质空泡化等。疯牛病给世界的畜牧业以及人们的生活带来极大危害，经济损失惨重。疯牛病的病原是朊病毒(PrPsc),它是由机体正常的朊蛋白(PrPc)转化而来，而PrPc是由朊蛋白基因（PRNP）编码而来，有试验证明PrPc的存在是朊病毒感染的基础。一方面由于机体正常的朊蛋白是固定在细胞膜上的，提取纯化较为困难，为了进一步在细胞水平上研究牛朊蛋白的生理生化作用和朊蛋白疾病的发病机制，本实验在体外构建了表达PRNP基因的真核表达载体;另一方面由于RNAi能够在细胞中高效特异的降解与其序列同源的mRNA，诱导特定靶基因的沉默，从而达到实现基因敲除或敲低的目的，因此，我们可以利用RNAi来敲低牛PrPc的量，从而使牛因缺乏转化的底物而可能具有抵抗朊病毒病的能力。　　 采用重叠延伸PCR法(SOE-PCR)全基因合成牛PRNP基因的cDNA，并克隆到真核表达载体pDsRED2-N1中，得到牛PRNP基因真核表达载体，转染牛骨髓间充质干细胞(BMSC)，并用800μg/mLG418对转染的细胞进行药物筛选。结果显示通过SOE-PCR成功扩增了牛PRNP基因的cDNA，并构建成真核表达载体，得到稳定表达目的蛋白的BMSC细胞。　　 利用RNAi技术，根据牛源PRNP基因cDNA设计3段siRNA序列和1个阴性对照序列，分别将其连接到RNA干扰载体pRNAT-U6.1/Neo上构建成shRNA载体，并将shRNA载体转染牛骨髓间充质干细胞(BMSC);通过Real-timePCR和Westernblotting筛选抑制效果最佳的载体，并用800μg/mLG418对转染最佳载体的细胞进行药物筛选。结果显示成功构建了3个靶向shRNA载体和1个阴性对照shRNA载体;3个靶向shRNA载体在不同时间段均在一定程度上下调了PRNPmRNA的表达，抑制了朊蛋白PrPc的生成，得到了一个最佳干扰载体sh3;通过药物筛选出了稳定转染sh3载体的细胞单克隆。　　 本研究获得了牛PRNP基因真核表达载体和有效抑制朊蛋白基因表达的sh3载体，筛选出稳定表达PRNP基因和sh3载体的细胞单克隆，上述结果可为抗疯牛病的进一步研究奠定基础。