苯丙酮尿症是由于肝脏苯丙氨酸羟化酶缺乏所致的一种严重的遗传性氨基酸代谢障碍性疾病,呈常染色体隐性遗传。其特征是人体苯丙氨酸代谢异常,导致高苯丙氨酸血症。未经治疗的患者,会出现脑组织损伤和不可逆的智力发育障碍,重症患儿可于3岁内死亡,其典型表现是头发发黄,智力发育迟缓、癫痫、湿疹等,尿中苯丙氨酸、苯丙酮酸、苯乳酸、苯乙酸增加,有特殊的鼠尿臭味。发病率为1/16500,携带者率为1/50～1/60。我国每年约有一千二百例PKU新病婴出生,给社会和家庭带来沉重的精神和经济负担。但由于PKU是可治性的遗传病之一,早期诊断、早期治疗是其预后的关键。PAH基因只在肝脏中表达,因此不能通过检测羊水中PAH酶活性进行产前诊断,只能通过检测PAH基因缺陷进行产前基因诊断。　　 现已查明,PAH基因定位于12号染色体的长臂上,即12q22-q24.1。PAH基因长达90kb,其中作为酶肽链的编码相关部分包括13个外显子和12个内含子,每个外显子的长度为57～892bp。mRNA全长为2.4kb,其阅读框架总长为1353bp,编码451个氨基酸。各内含子长度为1～23kb不等,全长为85kb;在PAH基因中内含子的比例很大,它虽然不影响此酶的mRNA的大小,但会影响基因的表达与分子的装配。　　 PAH基因除了缺失突变外,大多是点突变。近年来,随着基因突变检测技术的不断改进,新发现的突变种类也越来越多,在中国人中也已确定四十多种突变,突变大多在外显子区,63％是错义突变。从目前已报告病例来看,外显子7、12、6、5、10、11区域发生的突变频率很高,分别为27％、12.1％、12.1％、9.1％、7.6％和7.6％,占全部PAH基因突变的75％以上。而且这些突变位点的分布存在地区差异,中国北方人和南方人突变热点各不同。本研究旨在筛查东北地区人群的PAH基因,确定突变位点,分析东北地区PAH基因突变频率高的区域和位点,以便于建立一套PKU的分子诊断策略,实现PKU的早期诊断和产前诊断。　　 材料与方法：　　 一、研究对象:　　 (一)苯丙酮尿症患者:34名东北地区确诊为经典型PKU患者的外周血血样,由中国医科大学第二临床医院发育儿科提供。　　 (二)正常对照及标准对照:50名无遗传病家族史的健康成年人,其性别和年龄与患者相匹配。　　 (三)产前基因诊断:既往生育过PKU患儿(经临床确诊为经典型PKU)的东北地区孕妇(妊娠16～20周)8名,取其羊水及外周血。如上所有样品均获得患者知情并同意。　　 二、实验方法:　　 (一)应用PCR-DGGE技术检测34名患者PAH基因的第5、6、7、10、11和12外显子,DGGE电泳出现泳动变位样品进行正反双向测序,确定其PAH基因是否存在碱基变异。　　 (二)应用ARMS(Amplification refractory mutation system)技术检测患者碱基变异的位点和正常人的碱基序列,排除该碱基置换为SNP位点。　　 (三)产前基因诊断:对于先证者已经发现突变的家系进行DGGE筛查,有泳动变位的样品进行双向测序;对于先证者未发现突变的家系,进行内含子3内STR扩增,电泳后银染,然后作连锁分析。　　 结果：　　 1、应用PCR-DGGE技术结合测序,在34个患者中共筛查到21种突变,外显子12,7,11,6,5,10的突变频率分别是22.1％,16.2％,8.8％,5.9％,4.4％,0。在两个患者中分别发现PAH基因出现的两个新发突变,分别是p.N167H,c.499A＞C,AAC/CAC和p.1437＞Dfs,c.1311delT,1311de11bp。　　 2、对8个家系进行产前基因诊断,产后证实产前诊断结果符合产后诊断。　　 结论：首次在对东北地区人群的PKU患者进行突变筛查,初步建立了东北地区PKU患者的突变谱。本研究发现了PAH基因的一个新的错义突变c.499A＞C和一个缺失突变c.1311delT。