【摘 要】
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金银花属于忍冬科忍冬属,种植广泛,属于药食同源类植物,具有抗炎、免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。前期对金银花的研究主要集中于挥发油、有机酸、黄酮类等小分子物质,对多糖及其结构特性和生物活性研究较少。因此本文以金银花为研究对象,提取多糖并优化提取工艺,通过分离纯化,研究金银花多糖的理化性质、结构特性及抗炎活性。主要研究内容与结果如下:（1）单因素结合响应面法确定金银花多糖热水浸提工艺。具体工
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金银花属于忍冬科忍冬属,种植广泛,属于药食同源类植物,具有抗炎、免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。前期对金银花的研究主要集中于挥发油、有机酸、黄酮类等小分子物质,对多糖及其结构特性和生物活性研究较少。因此本文以金银花为研究对象,提取多糖并优化提取工艺,通过分离纯化,研究金银花多糖的理化性质、结构特性及抗炎活性。主要研究内容与结果如下:（1）单因素结合响应面法确定金银花多糖热水浸提工艺。具体工艺参数为料液比1∶30（g/m L）、浸提时间120 min、浸提温度70℃,多糖得率为6.45%±0.15%。（2）柱层析法纯化金银花粗多糖,通过光谱分析、色谱分析、波谱分析和电镜观察表征金银花多糖结构。金银花粗多糖（LJP）经DEAE-52纤维素柱分离纯化,得到LJP-1、LJP-2和LJP-3三个纯化组分。HPAEC和HPGPC-MALLS/RID测定结果表明:LJP-1主要由阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖组成,比例为43.57∶26.97∶21.61,平均分子量为153 k Da;LJP-2中主要含有葡萄糖、半乳糖醛酸和半乳糖,平均分子量为63.54 k Da;LJP-3主要含有葡萄糖、核糖和半乳糖,平均分子量为27.5 k Da。LJP-1中存在α构型和β构型的糖苷键;LJP-2和LJP-3中存在D-吡喃葡萄糖环。结合单糖组成、甲基化分析和核磁实验结果表明LJP-2的主链为T-β-D-Glcp（1→2）-α-L-Rhap（1→,→5）-α-L-Araf（1→,→4）-α-L-6Me Galp A(1→。电镜观察金银花多糖多呈片状和块状;LJP-1中多糖颗粒呈链状并交互成螺旋结构,LJP-2和LJP-3呈现出较大的非晶体形态。（3）通过巨噬细胞模型和斑马鱼模型评价金银花多糖抗炎活性。巨噬细胞模型抗炎结果表明:金银花多糖通过下调NF-κB信号通路中关键炎症因子的分泌和炎症蛋白的表达水平发挥抗炎作用,多糖对NO、TNF-α、IL-1β和IL-6分泌具有显著抑制作用并呈现剂量依赖效应。三个多糖组分对NO的最大抑制率分别为87.45%、89.17%和91.45%;对TNF-α抑制效果最明显,抑制率为55.18%～60.28%,其次是IL-1β和IL-6,抑制率分别为42.50%～43.87%和38.25%～41.06%。LJP-2对三种炎症蛋白p-IκBα、COX-2和i NOS表达抑制效果最佳,最大抑制率分别为79.24%、74.57%和83.09%。斑马鱼模型抗炎结果表明:金银花多糖通过下调炎症相关基因的表达水平,阻断NF-κB/MAPK信号通路的激活,有效缓解Cu SO4引起的炎症反应。LJP-2和LJP-3减少巨噬细胞侧线迁移效果最佳,迁移率最高减少95.87%和86.78%;多糖组分和剂量的差异造成对炎症相关基因表达水平抑制率的不同,最大抑制率分别为:Iκbα（50.51%）、My D88（38.81%）、COX-2（39.31%）、PTGES（22.48%）、NF-кB（48.19%）、IL-6（65.87%）、AP-1（12.89%）、IL-1β（73.22%）、MAPK（8.89%）和p-38（24.14%）。金银花多糖具有体内和体外抗炎活性,能够下调炎症因子分泌、炎症蛋白过度表达和炎症相关基因表达水平,为金银花多糖应用于保健品及天然药物的研发提供理论支持。
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