【摘 要】
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目的 建立同时检测猪用疫苗中牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）和非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）2种病原的双重荧光PCR方法，并进行验证及初步应用。方法 根据NCBI中收录的BVDV5’UTR和ASFV VP72基因序列，分别设计1对特异性引物和1条TaqMan探针，建立一种能同时检测BVDV和ASFV的
【基金项目】
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山东省重点研发计划（2020CXGC010801）； 山东省重大科技创新工程资助项目（2019JZZY020606）；
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目的 建立同时检测猪用疫苗中牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus,BVDV）和非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）2种病原的双重荧光PCR方法，并进行验证及初步应用。方法 根据NCBI中收录的BVDV5’UTR和ASFV VP72基因序列，分别设计1对特异性引物和1条TaqMan探针，建立一种能同时检测BVDV和ASFV的双重荧光PCR方法。对建立的方法进行灵敏度、特异性和精密性验证。采用建立的方法分别检测猪伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）活疫苗和猪瘟病毒（classical swine fever virus,CSFV）活疫苗（76批次）以及添加BVDV和重组质粒pMD-VP72的猪PRV活疫苗（各5瓶）中的BVDV和ASFV，并按照《中华人民共和国兽药典》三部（2020版）和中华人民共和国农业农村部公告第172号规定的方法分别对BVDV和ASFV进行复核检测。结果 建立的双重荧光PCR法最低可检测浓度为4.2拷贝/μL的BVDV重组质粒和浓度为8.7拷贝/μL的ASFV重组质粒；不与其他常见病原体发生交叉反应；重复性和试验间精密性检测的变异系数（CV）均不高于2%。结论 本实验建立的双重荧光PCR方法灵敏度高，特异性强，精密性好，可用于猪用疫苗中外源病毒的快速检测及猪用疫苗等生物制品的质量控制。
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