目的从耐药表型和基因型检测、外膜蛋白(OMP)和耐药质粒图谱分析三个方面,综合探讨产ESBLs肺炎克雷伯菌对抗生素的耐药性及其对β-内酰胺类抗生素的耐药机制,为抗感染治疗合理选用抗生素,预防和控制产ESBLs耐药菌的出现和播散,研制新型、高效的β-内酰胺类抗生素以及流行病学研究提供实验依据和指导.方法1对临床标本中分离的44株肺炎克雷伯菌进行系统鉴定和生化反应.2对肺炎克雷伯菌进行抗生素敏感性试验:(1)采用纸片扩散法(K-B法)检测分离菌株对19种抗生素的耐药性;(2)采用琼脂稀释法测定其对8种抗生素的最低抑菌浓度(MIC).3肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶的分析:(1)采用碘量法进行β-内酰胺酶测定;(2)表型确证实验纸片法进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)测定;(3)三维试验测定AmpC β-内酰胺酶;(4)协同试验进行金属β-内酰胺酶过筛检测.4采用Kado-Liu法提取产ESBLs菌株的质粒DNA,进行质粒图谱电泳分析.5质粒DNA转化E.coli XL1-Blue,检测转化子的药物敏感性.6 PCR扩增bla<,TEM>、bla<,SHV>和bla<,CTX>型ESBLs基因,部分扩增片断进行序列分析.7 SDS-PAGE对外膜蛋白(OMP)进行分离、鉴定.结论1肺炎克雷伯菌引起的感染以呼吸道为主,感染人群以老年人多见.2产ESBLs肺炎克雷伯菌发生率较高(达38.6％),对三代头孢菌素耐药严重,且同时存在对氨基糖苷类、磺胺类等药物耐药.3 ESBLs基因存在于大质粒上,可以通过质粒在不同种属间传递,易导致耐药性播散,应加强医院内耐药性监测,以防院内感染暴发流行.4本地区检测的多数为TEM型ESBLs,可能与头孢噻肟过多应用有关.5外膜蛋白(OMP)的缺失或表达降低与细菌耐药性有关.6细菌几种耐药机制并存时,耐药表型更为复杂,耐药程度更为严重,可供选择的治疗范围更窄.