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研究目的：本研究旨在通过对肝移植患者外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Regulatory T cell, Treg)及其CD45亚群在不同免疫状态下的表达、变化及影响因素的研究,深入探讨CD4+CD25+Foxp3+Treg在肝移植免疫耐受中的作用机制。研究内容：以肝移植患者为研究对象,观察C4+CD25+Foxp3+Treg及其CD45亚群在外周血中的变化；以外周血CD4+T淋巴细胞ATP含量评估肝移植患者免疫状态；探讨不同免疫状态下Treg在肝移植患者中的表达。研究方法：第一部分：随机选取肝移植术后6个月以上、临床状态稳定的患者91例,作为肝移植术后组；选取终末期肝病、在观察期内行肝移植术患者23例,作为手术对照组,分别在肝移植术前、术后1个月、3个月、6个月时行Treg检测。所有标本在荧光抗体染色后,以流式细胞仪检测CD4+CD25+Foxp3+Treg及其CD45RA、CD45RO、CD31分子的表达,分析年龄、术后时间、免疫抑制剂类型及浓度、肝移植术等因素对CD4+CD25+Foxp3+Treg的影响。第二部分：随机选取肝移植术后患者189例,利用ImmuKnow方法检测患者外周血CD4+T淋巴细胞ATP水平,分析性别、年龄、术后时间、排斥反应、感染等因素对其影响。根据CD4+T淋巴细胞ATP水平分为低免疫应答组(<225ng/mL)、正常免疫应答组(225-525ng/mL)和高免疫应答组(>525ng/mL),比较各组间排斥反应和感染的发生率。第三部分：以肝移植术后6个月以上、服用他克莫司(FK506)的肝移植患者为研究对象,按临床状态将所有患者分为感染组、排斥组和稳定组,比较各组间CD4+CD25+Foxp3+Treg比例及数量的差异。比较低免疫应答组、正常免疫应答组和高免疫应答组三组间CD4+CD25+Foxp3+Treg比例及数量的差异,并分析其与CD4+T淋巴细胞内ATP的相关性。研究结果：第一部分：肝移植术后患者CD4+CD25+Foxp3+Treg的数量显著低于健康对照组(2.79×107/L±2.02×107/LVS4.29×107/L±2.40×107/L,P=0.005)。免疫抑制剂的类型和浓度对其影响明显。雷帕霉素(Rapa)组中CD4+CD25+Foxp3+Treg比例为10.36%±2.52%,明显高于FK506组(6.97%±3.28%,P=0.004)与健康对照组(6.66%±2.41%,P=0.005)。以FK506谷值浓度7.0ng/mL为标准,将其分为高浓度组与低浓度组,低浓度组中CD4+CD25+Foxp3+Treg比例为7.56%±3.31%,明显高于高浓度组的4.84%±2.11%(P=0.001)。CD4+CD25+Foxp3+Treg比例在肝移植后逐步下降(P=0.003),肝移植术前(10.99%±5.49%)高于术后1个月(7.59%±4.20%)、3个月(6.26%±2.98%)和6个月(5.65%±2.97%),亦明显高于健康对照组(6.66%±2.41%)(P值均小于0.05)。CD4+CD25+Foxp3+Treg中激活型CD45RO+Treg比例显著高于初始型CD45RA+Treg(71.77%±14.66%VS14.64%±11.08%,P=0.000),但二者表达CD31的比例无差异(P=0.517)。CD45RA+Treg表达Foxp3的比例为77.04%±20.69%,高于CD45RO+Treg的70.77%4±19.08%(P=0.002),并且CD45RO+Treg的比例与患者年龄正相关(r=0.526,P=0.000),而CD45RA+Treg与年龄负相关(r=-0.325,P=0.003)。第二部分：共对189例患者进行290例次外周血CD4+T淋巴细胞ATP检测,低免疫应答组、正常免疫应答组和高免疫应答组排斥反应发生率分别为0.9%、3.4%和15.8%,存在统计学差异(P=0.021)；感染发生率分别为20.7%、13.7%和5.3%,存在统计学差异(P=0.000)。第三部分：不同临床状态下,CD4+CD25+Foxp3+Treg在CD4+T细胞中的比例存在差异(P=0.010),排斥组比例(4.38%±1.22%)分别低于稳定组(6.97%±3.28%,P=0.029)与感染组(9.16%±4.12%,P=0.001),但与健康对照组(6.66%±2.41%)比较则无差异存在(P=0.088),感染组中Treg匕例分别高于排斥组、稳定组和健康对照组(P值分别为0.001、0.022和0.028)。无论是细胞比例,还是外周血中的绝对数量CD4+CD25+Foxp3+Treg在低免疫应答组、正常免疫应答组和高免疫应答组中的比较均无差异(P=0.355和P=0.342)。CD4+CD25+Foxp3+Treg比例与CD4+T淋巴细胞内ATP值亦无直线相关关系(r=-0.130,P=0.188)。研究结论：(1)肝移植患者术前的CD4+CD25+Foxp3+Treg水平高于健康对照组,在术后呈下降趋势。CD4+CD25+Foxp3+Treg比例与免疫抑制剂类型有关,Rapa能够促进Treg匕例增加,而FK506(?)制Treg比例增加,并且与FK506的浓度有关。激活型CD45RO+Treg的比例高于初始型CD45RA+Treg,前者与患者年龄呈正相关,后者与年龄呈负相关。但初始型CD45RA+Treg表达Foxp3的比例高于激活型CD45RO+Treg。2)肝移植术后患者外周血CD4+T淋巴细胞ATP能够较为准确的反映肝移植术后患者免疫状态。低免疫应答组感染发生率明显升高,高免疫应答组排斥反应率明显升高。(3)在不同临床状态下CD4+CD25+Foxp3+T细胞比例差异明显,发生排斥反应时CD4+CD25+Foxp3+Treg比例降低,发生感染时CD4+CD25+Foxp3+Treg比例升高。但以CD4+T淋巴细胞内ATP划分的各免疫应答组间CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞的比例和数量均无差异。二者间也不具有直线相关关系。