【摘 要】
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本文研究目的：通过体外实验，运用现代分子生物学实验技术，探讨苦参素抗胃癌作用靶点及机制，为临床运用苦参素治疗胃癌提供必要的理论依据。 研究方法： 1.用不同剂量的苦参素
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本文研究目的：通过体外实验，运用现代分子生物学实验技术，探讨苦参素抗胃癌作用靶点及机制，为临床运用苦参素治疗胃癌提供必要的理论依据。
研究方法：
1.用不同剂量的苦参素注射液，分别作用于人胃癌细胞系MGC-80312h、24h、36h、48h，采用四甲基偶氮唑盐光吸收法(MTT法)检测MGC-803细胞的增殖活性；通过计算细胞增殖抑制率、药物半数抑制浓度(IC50)、绘制细胞增殖抑制曲线等，综合分析苦参素对人胃细胞系MGC-803细胞增殖活性的影响。
2.应用倒置显微镜和透射电子显微镜技术，观察苦参素作用于人胃癌细胞系MGC-803后，细胞生长状况及形态学改变。
3.应用流式细胞仪，对细胞周期、细胞凋亡率以及细胞内相关蛋白(PCNA、Bcl-2、Bax、CyclinD1和CDK4)表达水平进行分析，探讨苦参素对人胃细胞系MGC-803增殖抑制的作用机制以及与基因表达调控的关系。
研究结果：
1.MTT检测结果显示：苦参素对人胃癌细胞系MGC-803具有显著的细胞杀伤作用和细胞生长抑制作用，与阴性对照组比较，差异具有统计学意义(P=0.000＜0.05)；且具有明显的剂量效应关系，直线回归方程为：Y=8.313-10.469X,其中，r为-0.971，P=0.000＜0.05。
2.倒置显微镜和透射电子显微镜观察结果显示：苦参素处理24h后，可见典型的细胞凋亡变化，细胞体积缩小，细胞核染色质聚集在核膜下，使核膜厚薄不均或呈半月形；另外，还可见部分细胞膜结构破坏，胞浆内容物外溢，细胞核和细胞质内明显水肿等变化。
3.流式细胞仪检查细胞周期、凋亡指数以及细胞增殖、凋亡和细胞周期调控相关基因蛋白表达结果显示：1)苦参素处理24小时后，G0/G1期细胞明显增多，与阴性对照组相比，差异具有统计学意义(P＜0.05)；S期细胞明显减少，与阴性对照组比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)。2)细胞凋亡指数与阴性对照组相比随剂量而增加，差异具有统计学意义(P＜0.01)。3)细胞内PCNA、CyclinD1、CDK4和Bcl-2表达量明显减少，Bax表达量显著增加，经统计学处理差异均具有统计学意义(P＜0.05)。
研究结论：
1.苦参素对人胃癌细胞系MGC-803具有显著的增殖抑制作用，其作用具有剂量和时间效应。
2.苦参素对人胃癌细胞系MGC-803的增殖抑制作用，主要表现在抑制增殖、促进凋亡和直接杀伤三个方面。
3.苦参素对人胃癌细胞系MGC-803增殖抑制的主要作用机制与细胞周期阻滞于G0/G1期，以及抑制细胞内PCNA和细胞周期G1→S期调控点的调节因子CyclinD1和CDK4的表达有关。
4.苦参素对人胃癌细胞系MGC-803具有促进凋亡作用，其作用机制主要是通过上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达水平有关。
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