【摘 要】
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多粘菌素E是一种由多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)产生的碱性多肽类抗生素,含有四种前体氨基酸L-Dab、L-Leu、D-Leu和L-Thr。据报道多粘菌素合成酶基因簇pmx(pmxABCDE)
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多粘菌素E是一种由多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)产生的碱性多肽类抗生素,含有四种前体氨基酸L-Dab、L-Leu、D-Leu和L-Thr。据报道多粘菌素合成酶基因簇pmx(pmxABCDE)、磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶基因sfp、二氨基丁酸氨基转移酶基因ectB和相关调控基因spo0A和abrB参与多粘菌素的合成,本论文研究相关基因的转录及调控,并对负调控基因abrB突变株的构建进行尝试。利用实时荧光定量PCR技术检测不同发酵阶段多粘菌素合成相关基因的转录量发现:多粘菌素合成相关基因的转录水平变化趋势与多粘菌素的产生有相应的关系,其中spo0A、abrB和pmxA对多粘菌素产量影响较大。在高产株pmxA、pmxE、pmxC、pmxD、ectB的转录量均明显高于零产株,而负调控基因abrB转录远低于零产株。研究多粘菌素E前体氨基酸、间接前体氨基酸的添加对多粘菌素E合成相关基因转录的进行调控,结果表明:添加前体氨基酸对相关基因的转录水平均有影响,对多粘菌素E的合成均有抑制作用,其中L-Dab、L-Leu、D-Leu抑制pmx的转录;L-Thr影响spo0A、abrB转录水平,从而导致多粘菌素E的产量降低。添加间接前体氨基酸L-Asp具有与L-Dab添加相似的影响。为构建负调控基因abrB突变株,建立了P.polymyxa C12菌株的高效电击转化体系:菌体浓度OD60000 0.8、电场强度18 KV/cm、质粒浓度1μg,复苏时间4h。以卡那霉素抗性基因Km作为筛选标记,构建H1KmH2长片段和重组质粒pMD19-H1KmH2,分别转化P.polymyxa C12菌株,获得卡那抗性转化子,经验证推测为abrB基因突变株。P.polymyxa C12(pMD19-H1KmH2)菌株证明重组质粒可整合到P.polymyxa C12基因组中。
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