外生菌根生防作用及其机理研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yzymd_223
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本文以辽宁省主要针叶树外生菌根真菌为研究对象,在大型真菌调查、外生菌根真菌采集、菌种分离培养基的筛选、分离菌种的菌根合成鉴定及生物学测定等基础上,通过对外生菌根共生体形成的特殊结构的观察、对土传病原菌拮抗作用的测试、与抗病相关酶活性的测定、对宿主促进生长作用的测定、与根际微生物之间关系测定、对农药耐药性的测定等,系统研究了外生菌根真菌及外生菌根对病原菌的拮抗作用及机理,取得以下研究结果。 采用固定标准地(设置)和线路调查方法,对沈阳棋盘山风景区油松林下大型真菌进行定点详细调查,获得大型真菌116种,隶属于29科58属。研究了棋盘山风景区油松林下大型真菌的生态多样性以及外生菌根真菌所占比例,根据相似性公式,测定了棋盘山风景区油松林下大型真菌种类多样性与辽宁省白石砬子自然保护区、章古台、西藏的南迦巴瓦峰大型真菌的多样性的相似性分别为49.9%、75%、59.3%;在全省范围内对辽宁省主要针阔混交林进行了外生菌根真菌的种类调查和生境调查,获得外生菌根真菌82种(其中菌根性食、药用菌66种),隶属于13科21属。掌握了辽宁省油松、落叶松、樟子松、红松以及柞树林下的外生菌根真菌的种类、发生期、所占比例、优势种以及环境因子与子实体问的关系,对主要外生菌根真菌生境进行了阐释,对外生菌根真菌子实体与其他非菌根真菌子实体间的关系进行了生境观察。发现了6种辽宁省大型真菌新记录种,其中2种是外生菌根真菌。根据生境条件及其他天然成分,配制了6大类40余种分离血红铆钉菇的初筛培养基,在此基础上开发了用于多种外生菌根真菌分离的复筛培养基22种,结果在PDA培养基上适当添加外生菌根真菌生境中的某些成分,是大多数外生菌根真菌分离的良好培养基。描述了25种外生菌根真菌的菌落特征,对分离的部分菌种进行了菌丝特征的显微观察,部分种类进行了与油松苗菌根合成的鉴定。供试菌种与油松形成二叉状及棒状菌根。所合成菌根的菌套和哈蒂氏网对病原菌的侵染起机械屏蔽作用。 对分离的部分菌种进行了碳源和氮源及C/N测定、温度和pH值以及培养基对外生菌根真菌菌丝生长的影响、固体发酵培养研究等,结果所有供试外生菌根真菌对碳源的利用较广,包括蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、淀粉、果糖等,但是不能利用半乳糖。最佳氮源是营养肉汤,在酵母汁、牛肉膏和蛋白胨上大部分菌种也都表现良好,个别菌种对铵态盐利用很好。在10:1、20:1和30:1三个比例上外生菌根真菌生长最好;最适温度为20℃~25℃,最佳pH值为5.5~6.5。在菌土培养基、酵母汁培养基、麸皮培养基、大豆培养基、玉米培养基、菌土培养基上生长最快。腐熟锯末80%+麦麸20%、草炭78%+麦麸20%为外生菌根真菌主要扩繁基质,是供试6种外生菌根真菌最适合的扩繁基质。 对12种外生菌根真菌,采用平板对峙的方法,测定了对立枯丝核菌、尖孢镰刀菌、赤腥病菌和链格孢菌的抑制作用,进行了重寄生现象显微观察,开展了挥发性与非挥发性物质产生的研究,测定了外生菌根真菌细胞壁降解酶即几丁质酶、β-1,3葡聚糖酶、纤维素酶等活性以及外生菌根真菌的过氧化物酶、多酚氧化酶和漆酶等。结果表明有lO种外生菌根真菌对病原菌有抑制作用,其中丝膜菌对病原菌有消(瓦)解作用,表现为与病原菌重叠后,重叠菌落立枯丝核菌等原生质外渗,丝膜菌能够吸收利用病原菌,最终病原菌瓦解消失,酶活测试表明是通过产生几丁质酶对病原菌、特别是对立枯丝核菌起抑制作用的,同样(小)口蘑、铦囊蘑也是通过产生几丁质酶抑制病原菌的;真姬离褶伞与病原菌对峙培养表明,在一定距离真姬离褶伞就抑制病原菌的生长,测试表明是液体培养滤液对病原菌有抑制作用,滤液在60℃水浴和121℃高压灭菌30min情况下对尖孢镰刀菌起一定的抑制作用,是分泌非挥发性抗生物质的结果。紫丁香蘑对病原菌抑制是通过β-1,3葡聚糖酶作用的。同样丝膜菌、锸囊蘑、灰紫香蘑和绒白乳菇中B-1,3葡聚糖酶也在不同程度上发挥作用。腊伞不产生β-1,3葡聚糖酶和几丁质酶。供试菌种都不同程度地产生过氧化物酶、多酚氧化酶和漆酶。这些研究结果表明,外生菌根真菌主要通过产生抗生物质、细胞壁降解酶和防御酶系对病原菌进行拮抗作用的。 测定了外生菌根真菌接种油松苗后,油松苗生物量、叶绿素、游离脯氨酸等含量变化,同时测试了与抗病相关的酶,如苯丙氨酸解氨酶、过氧化物酶、多酚氧化酶等,阐述了外生菌根真菌与宿主根形成共生关系后,能够促进宿主生长,提高宿主防御酶系活性,进而从提高宿主健康增强抗病性方面揭示生防作用机理。同时测定了血红铆钉菇、乳牛肝等菌根际微生物类群,进行了与外生菌根真菌、病原菌等关系的研究,获得了对病原菌有抑制作用的菌根际微生物2种。采取柱形平板法测试了7种杀菌剂、3种杀虫剂和5种除草剂对外生菌根真菌的影响,结果有2种杀菌剂、3种杀虫剂和1种除草剂在平板测试中对外生菌根真菌无影响。杀菌剂绿佳宝对灰紫香蘑有促进生长作用,这些农药可在苗圃作业时,与外生菌根真菌混用联合防控病原菌。多菌灵等对外生菌根真菌和病原菌都有抑制作用,圃地应用时应从时间和空间上分开。采取酶点试法测定了供试外生菌根真菌的漆酶、多酚氧化酶和过氧化物酶,为揭示外生菌根真菌对土壤中农药残留的降解作用提供了依据。 本研究对探讨外生菌根在土壤微生态中的作用及其机制具有重要意义,为进一步研究开发高效防病促生长多功能外生菌根真菌菌剂提供科学依据。
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