奶牛子宫内膜炎是目前世界各国奶牛养殖和生产中最为常见且造成损失最大的疾病之一,在我国65%至80%奶牛不孕是子宫内膜炎所导致的。引起奶牛子宫内膜炎的主要病原微生物包括细菌、支原体、钩端螺旋体、病毒、真菌及毛滴虫等,细菌中主要是大肠埃希菌、变形杆菌、链球菌和金黄色葡萄球菌等。为了确定大肠埃希菌致病能力与HPI毒力岛irp1基因的关系,本试验使用自杀性质粒p RE112构建了大肠埃希菌irp1基因缺失株和回补株,进行了irp1基因的功能验证,获得如下结果:1. 对14株大肠埃希菌（编号E1-E14）进行氯霉素抗性和irp1基因的检测,菌株E1、E4、E6、E8、E9和E12对氯霉素敏感且irp1基因阳性,选取菌株E4进行irp1基因敲除和回补。2. 使用重叠PCR法,以E4基因组为模板,融合irp1上下游同源臂,克隆融合片段到自杀性质粒p RE112,成功构建重组自杀性质粒p REΔirp1。以含重组自杀性质粒p REΔirp1的大肠埃希菌X7213为供体菌,大肠埃希菌E4为受体菌进行共培养,通过两步同源重组筛选出缺失株E4Δirp1。最后同样使用自杀性质粒p RE112得到回补株E4Δirp1-C。3. 对亲本株、缺失株和回补株进行相关生物学特性的研究,结果表明大肠埃希菌irp1基因缺失会导致:（1）大肠埃希菌对小鼠的LD₅₀降低10倍;（2）除基因hly A和csg B以外,基因ecp A,fim A,kps D,fae G,clb D,stf G,sfm H,ipf A和fim H表达量不同程度的减少;（3）结晶紫染色法测定生物膜形成能力时,其OD₆₀₀值下降了29.8%。基因回补后功能恢复。此外,亲本株、缺失株和回补株的生化特性、药物敏感性、生长规律和铁载体形成能力没有变化。说明irp1基因与大肠埃希菌致病能力密切相关,irp1基因的缺失或者表达抑制会降低大肠埃希菌毒力,而对其生化特性、药物敏感性、生长规律和铁载体形成能力没有影响。