【摘 要】
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本论文以杨树皮为原料,系统研究了杨树皮总黄酮乙醇提取和酶-超声辅助提取的最佳工艺条件,并对分离纯化方法、结构鉴定、体外抗氧化、降血糖、抗肿瘤活性及抑菌活性进行了较系统的研究,为杨树皮的开发与利用提供基础数据。1.论文进行了杨树皮黄酮定性分析,并采用了11种方法进行了杨树皮提取黄酮实验,得出了最佳提取方法是酶-超声辅助提取技术。对此方法进行了单因素结合响应面试验,得出杨树皮总黄酮最佳提取工艺为:杨树
【基金项目】
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十三五国家重点研发计划项目课题,课题名称为《非木质资源采集预处理及高效提取关键技术与装备》,课题编号为:2016YFD0600801
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本论文以杨树皮为原料,系统研究了杨树皮总黄酮乙醇提取和酶-超声辅助提取的最佳工艺条件,并对分离纯化方法、结构鉴定、体外抗氧化、降血糖、抗肿瘤活性及抑菌活性进行了较系统的研究,为杨树皮的开发与利用提供基础数据。1.论文进行了杨树皮黄酮定性分析,并采用了11种方法进行了杨树皮提取黄酮实验,得出了最佳提取方法是酶-超声辅助提取技术。对此方法进行了单因素结合响应面试验,得出杨树皮总黄酮最佳提取工艺为:杨树皮1 g,每克杨树皮加酶量37 mg、p H值4.6、酶解时间1.75 h、酶解温度56℃的条件下浸提后再在温度40℃、功率160 W下超声处理30min,此条件下黄酮类化合物得率为4.56%。而传统乙醇方法得出杨树皮总黄酮乙醇提取最佳工艺条件为:乙醇浓度40%、料液比1:19（g:m L）、提取温度42℃、提取时间84 min,其黄酮得率为3.85%。由此可见,酶-超声辅助提取技术比传统乙醇提取方法总黄酮得率提高了18.4%。2.提取液依次经萃取分离得到石油醚相、二氯甲烷相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相5个萃取组分,对黄酮含量最高的乙酸乙酯相经AB-8大孔树脂吸附梯度洗脱,得到组分Fr1至Fr8。对组分Fr7进行葡聚糖凝胶LH-20、制备型高效液相色谱分离纯化,得到化合物A、B、C和D。采用紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）、高效液相色谱（HPLC）、液质联用（HPLC-MS）、~1H-NMR、13C-NMR、~1H-~1H COSY、HSQC、HMBC和NOESY谱等分析方法对化合物A,B、C和D进行结构分析;A、C、D物质鉴定结果分别为5,7,4’,5’-四羟基-3’-甲氧基黄烷醇、杨梅素和7-O-甲基花旗松素,B物质为4’-羟基黄酮醇或7,4’-二羟基黄酮醇。3.对杨树皮不同萃取组分进行体外抗氧化和降血糖活性研究。结果表明,乙酸乙酯相和二氯甲烷相在浓度0.08 mg/m L时,对DPPH自由基的清除能力和L（+）-抗坏血酸相当,二者的IC50值分别为0.025 mg/m L、0.026 mg/m L。乙酸乙酯相和二氯甲烷相对羟自由基的清除能力强于其他萃取相,但仍弱于L（+）-抗坏血酸,其IC50值分别为3.407mg/m L、7.401mg/m L,石油醚相则有促进氧化的作用。在降血糖方面研究了萃取组分对α-淀粉酶的抑制效果,5个萃取组分对α-淀粉酶的抑制率远低于阿卡多糖,说明其降血糖作用不明显。4.通过MTT法对分离出的黄酮类化合物进行体外抗肿瘤活性研究,化合物D对人肝癌细胞株（Hep G2）和人乳腺癌细胞株（MCF7）均有一定的抑制效果,IC50值分别为47.1μmol/L、96.9μmol/L,化合物A对人乳腺癌细胞株（MCF7）有一定的抑制效果,IC50值为97.9μmol/L,而C、D产物对2种肿瘤细胞无明显抑制作用。抑菌活性方面,化合物A在浓度为125μg/m L时开始对尖孢镰刀菌有生长抑制作用,而化合物B、C、D对所测4种真菌均无抑制活性。
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