【摘 要】
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目的:研究卵巢癌中miR-137对星形细胞上调基因(AEG-1)的作用,并证实这一机制在卵巢癌的发生及进展中的作用。 方法:(1) AEG-1的下调是否抑制了卵巢癌细胞的生长:通过免疫印
【出 处】
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中山医科大学 中山大学中山医学院 中山大学
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目的:研究卵巢癌中miR-137对星形细胞上调基因(AEG-1)的作用,并证实这一机制在卵巢癌的发生及进展中的作用。 方法:(1) AEG-1的下调是否抑制了卵巢癌细胞的生长:通过免疫印迹实验(Western Blot)、MTT实验、细胞克隆形成实验、细胞周期检测;(2) AEG-1是否是miR-137的靶点:通过荧光素酶报告基因检测、实时定量PCR分析(qRT-PCR)、免疫印迹实验检测;(3)AEG-1与miR-137在卵巢癌标本中的表达及两者相关性:总共30个冰冻标本(包括10例正常的和20例恶性的卵巢组织)收集于哈尔滨医科大学附属肿瘤医院。20例恶性的组织中包括12例卵巢浆液性囊腺癌,4例子宫内膜样腺癌,4例透明细胞癌。并通过实时定量PCR分析、免疫印迹实验、Spearman相关分析检测;(4) miR-137是否能够抑制卵巢癌细胞的体内和体外的生长:通过MTT实验、细胞克隆形成实验、细胞周期检测及裸鼠成瘤实验检测;(5) AEG-1结构的恢复是否能够抑制miR-137诱导的卵巢癌细胞的生长抑制作用:通过免疫印迹实验、MTT实验、细胞克隆形成实验、细胞周期检测。 结果:(1)我们证明了miR-137与AEG-1的3UTR区域结合后,下调了AEG-1的表达,并证明在卵巢癌中miR-137与AEG-1的表达水平负相关。(2)不管是卵巢癌细胞中AEG-1的下调,还是miR-137的上调都减少了体外细胞的增殖、集落的形成以及诱导G1期的阻滞。(3) miR-137的上调抑制了裸鼠体内的肿瘤生长。(4)对缺少3UTR区域的AEG-1基因的修复明显改善了由miR-137诱导的对细胞生长的抑制以及细胞周期的阻滞。 结论: miR-137负向调控癌基因AEG-1,并抑制体内、体外卵巢癌细胞的生长。我们的发现可以,至少部分可以解释在卵巢癌中AEG-1是上调的,并为卵巢癌的进一步预防和治疗提供新的治疗靶点。
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