猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）在引起猪的相关疾病综合征中起到重要作用,是最小的哺乳动物病毒。目前,对西藏地区的猪圆环病毒2型相关报道较少。本研究通过流行病学调查、多重荧光定量PCV2分型方法的建立和感染性克隆构建与遗传特性研究,旨在了解西藏林芝地区PCV2流行情况并建立起快速及定量的PCV2分型方法,深入研究藏猪PCV2分离毒株遗传变异的意义与作用。1.为了解西藏林芝市猪圆环病毒2型的分子流行病学以及毒株的遗传变异情况,采用聚合酶链反应技术,对2018～2019年在西藏林芝不同猪场采集的95份样本进行了PCV2的检测,扩增并克隆阳性样本的全基因组序列进行测序,获得9株PCV2全长基因组序列。藏猪阳性病料经无菌处理后接种PK-15细胞,经PCR检测及测序鉴定成功分离得到1株藏猪来源的PCV2毒株,命名为ZZ2毒株。对阳性样本的全基因组序列进行遗传变异分析,发现9株PCV2阳性毒株中有6株为PCV2b基因型,3株为PCV2d基因型,其中2株藏猪分离株为PCV2b亚型,但全长仅有1756 bp,在复制起始区域有11 bp长度的核苷酸序列缺失。2.为建立一种检测猪圆环病毒2型多重实时荧光定量PCR方法,可对3种基因型PCV2a、PCV2b、PCV2d检出并分型。基于PCV2的ORF2基因保守序列区设计通用引物,并依据不同的基因型分别设计Taqman探针,3条探针分别标记不同的荧光基团,建立和优化多重荧光定量PCR方法的反应体系,检测其灵敏性、重复性和特异性。结果显示建立的多重荧光定量PCR方法最低检测的拷贝数为PCV2a 100 copies/μL、PCV2b 57 copies/μL和PCV2d 100 copies/μL。通过该方法检测227份PCV2阳性临床样本,结果显示PCV2a、PCV2b、PCV2d三种基因型的混合感染较为严重,检出率为55.95%,PCV2b、PCV2d两种基因型共同感染检出率次之,为17.62%。选取部分样本测序鉴定,结果测序分型与多重荧光定量PCR分型的结果具有较高的一致性,西藏9例检测为阳性的样本均为PCV2单一基因型感染且分型结果一致。3.为进一步研究分离得到的ZZ2毒株缺失的11 bp核苷酸序列是否对PCV2的复制能力和致病性有影响,应用反向遗传技术构建了核苷酸缺失的ZZ2全长感染性克隆质粒和基因型为PCV2b正常序列的5123毒株全长感染性克隆质粒,同时利用基因重组技术构建了核苷酸回补后的ZZ2（1767 bp）全长感染性克隆质粒和核苷酸敲除后的5123（1756 bp）核苷酸缺失感染性克隆质粒,核苷酸回补与核苷酸敲除序列为藏猪分离毒株上相对应的缺失核苷酸片段。在构建的四种感染性克隆质粒转染PK-15细胞后,通过PCR、q PCR、IFA和Western blot等方法检测PCV2 ZZ2毒株、ZZ2核苷酸回补毒株（ZZ2-HB）、5123毒株和5123核苷酸敲除毒株（5123-QC）病毒拯救成功,传代至第10代病毒增殖趋于稳定,但ZZ2拯救毒株拷贝数低于其他三株。通过检测相关免疫因子、自噬标志因子和凋亡因子的转录水平,发现核苷酸缺失株抑制IFN-α1转录,在感染后期促进IL-8表达,在感染早期抑制细胞自噬,并对细胞凋亡有抑制作用。