【摘 要】
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目的:探寻人脑复发胶质瘤干细胞耐辐射的可能关键蛋白。方法:将处于对数生长期的分化的胶质瘤干/祖细胞SU3以4Gy X射线连续照射5次,每次间隔7天,并根据放射剂量-存活曲线将经
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目的:探寻人脑复发胶质瘤干细胞耐辐射的可能关键蛋白。方法:将处于对数生长期的分化的胶质瘤干/祖细胞SU3以4Gy X射线连续照射5次,每次间隔7天,并根据放射剂量-存活曲线将经过5次辐照存活下的SU3鉴定为更加耐辐射的SU3-5R,SU3-5R可作为复发胶质瘤干细胞模型。用iTRAQ方法检测SU3与SU3-5R差异表达蛋白质并建立数据库,将SU3-5R/SU3比值>1.2或<0.8定义为有差异;根据此蛋白数据库做GO/KEGG富集及蛋白互作分析,初筛出有意义的蛋白,并对有意义的蛋白进行q-PCR基因验证确定复发胶质瘤干细胞耐辐射的可能关键蛋白。结果:克隆形成实验:SU3与SU3-5R的SF2(照射2Gy后细胞存活分数)分别为:SU3(SF2)=0.3633±0.0255,SU3-5R(SF2):=0.4363±0.0137,P=0.0121(P<0.05);细胞增殖能力:SU3与SU3-5R细胞培养第二天细胞OD值有统计学差异,P值为0.0097;流式法测细胞周期实验:予4Gy照射后,SU3和SU3-5R G2/M期比例分别增加1.1682±0.0654倍、0.5041 ±0.3989倍,P值为0.0466;流式法测细胞凋亡实验:予4Gy照射后,SU3和SU3-5R凋亡比例分别增加21.3296±9.0232倍,2.9814±0.1236倍,P=0.0244。蛋白质组学分析结果:SU3-5R与SU3比差异表达蛋白有5665个,其中5020个蛋白可以相对定量,其中上调的有325个,下调的有348个。进行GO/KEGG富集及蛋白互作分析后初筛14个蛋白,对这14个蛋白进行基因表达的验证,KIF4A、CCNB1、CDC20、SMS、CBR2这5基因的表达与蛋白质组学结果一致。结论:1.SU3-5R较SU3更加耐辐射,SU3-5R增殖速度更快,照射后G2/M期比例和凋亡比例增加较SU3减少;2.KIF4A、CCNB1、CDC20、SMS、CBR2可能与人脑复发胶质瘤干细胞耐辐射相关。
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