柚皮苷对去势大鼠骨质疏松性骨折愈合的影响

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目的通过影像学、组织学、骨密度及生物力学检查,探讨柚皮苷对去势大鼠骨质疏松性骨折愈合过程的影响。方法1.骨质疏松模型的建立:选取50只成年雌性SD大鼠,随机分成去势组(OVX)40只,假手术组(SHAM)10只。去势组在无菌条件下经背侧摘除双侧卵巢,假手术组找到卵巢后不切除,只切除同重量的脂肪组织。2.骨质疏松性骨折模型的建立:确定骨质疏松模型建立成功后,在无菌条件下,对所有大鼠进行左股骨干中段骨折造模。在股骨中段行横行截骨,制作横行骨折模型,用克氏针髓内固定。3.给药方法和剂量:再将制成骨折模型的40只大鼠,随机分成骨质疏松模型空白组(OVX+N)和3个实验组(OVX+L/M/H),三个实验组分别予以柚皮苷(低剂量组1mg/kg,中剂量组10mg/kg,高剂量组100mg/kg)灌服,对照组及模型组给予同体积的双蒸水灌服,共4周。4.实验观察指标4.1骨密度检查:OVX术后饲养12周,行双能X线骨密度检查,验证骨质疏松模型建立。4.2影像学观察:OPF术后即刻、4、8周,用术中用C型臂X光机机行X片检查,观察髓内针位置和骨折断端愈合情况。4.3骨痂组织学检查:OPF术后8周,处死5只大鼠,取骨折处骨痂组织(含骨折断端,长约3cm的骨组织),将组织固定---脱钙---包埋---切片---HE染色,光镜下行组织学观察。4.4生物力学测量:取术侧股骨,剔除软组织,拔除髓内针。采用万能材料试验机行三点弯曲实验,测量最大承载负荷。结果1.骨密度检查:卵巢切除术后12周行骨密度测定,OVX组BMD显著低于Sham组(P<0.05),体重明显高于Sham组,差异均有统计学意义(P<0.05),说明骨质疏松模型建立。2.影像学观察结果:OPF术后即刻X线检查示,各组股骨骨折断端对位对线均良好,未见明显差异。OPF术后4周X线显示:Sham组骨折线稍显模糊,断端仍有透亮线存在,有大量骨痂形成;OVX+M、H两组骨折线清晰,有少量骨痂形成;OVX及OVX+L两组骨折线清晰,较少骨痂形成。OPF术后8周X线显示:Sham组骨折线模糊,有连续骨痂通过骨折断端;OVX+H、M、L三组骨折线稍显模糊,有大量骨痂形成,生成骨痂大小依次为H>M>L; OVX组骨折断端仍有透亮线存在,骨折断端为纤维性软骨痂。3.骨痂组织学检查:术后8周Sham组见成熟板状骨中大量成熟骨小梁形成,骨小粱较粗且排列致密有序,数目较多,排列方向与主应力方向一致;OVX+M组骨折处软骨内成骨清晰可见,局部编织骨向板层骨过度,原始骨小梁逐渐改建成为成熟骨小梁,数目较少,粗细不均且排列紊乱,与主应力方向不一致,互相交错成网状;OVX+L、M两组有大量原始骨小梁,且骨小梁较细,间隙较大,排列方向不均匀,骨小梁周边成骨细胞和骨细胞较多;OVX组软骨痂周边部软骨细胞出现变性坏死,并开始出现少量原始小梁状骨,原始小梁状骨边成骨细胞数较少,原始骨小梁间为结缔组织。4.生物力学检查:术后8周,实验组的左侧股骨的三点弯曲载荷均高于OVX组,但均低于Sham组,具体为:Sham组>OVX+H组>OVX+M组>OVX+L组>OVX组.Sham组与其余四组差异具有统计学意义(P<0.05),OVX组与OVX+H及OVX+M差异均有统计学意义(P<0.05), OVX组与OVX+L差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.柚皮苷对去卵巢大鼠OPF有促进骨折愈合的作用,且可能存在一定的剂量依赖关系。2.双侧卵巢切除方法制造骨质疏松模型及观察时间科学、可靠。
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