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背景:过敏性疾病,包括过敏性哮喘,过敏性鼻炎和特异性皮炎,是免疫系统超敏反应引起的常见疾病。随着社会的发展,过敏性疾病的发病率逐年增加。肥大细胞作为先天免疫的主要效应细胞之一,通过释放各种炎症介质在过敏性疾病的发病中起主要作用。因此,肥大细胞是治疗过敏性炎症的关键靶标。目前,抗组胺药物和类固醇药物的使用仍然是临床上治疗过敏性疾病的主要策略,但是其存在副作用和不良反应。同时越来越多的生物制剂也应用于临床,但是其复杂的剂量和管理方式导致其无法大范围推广。因此,过敏性疾病的治疗需要新的治疗策略以便于为患者提供更好的选择。我们在研究中发现临床用药帕博西尼和匹莫齐特对于肥大细胞的活化具有抑制作用。帕博西尼和匹莫齐特已经被美国FDA批准用于临床疾病的治疗,其中帕博西尼已经被批准为雌激素受体阳性（ER+）/人表皮生长因子受体2阴性（HER2-）晚期乳腺癌的一线治疗药物;匹莫齐特则被批准用于慢性精神病、Tourette综合征和耐药性抽动症的治疗。目的:1.研究临床用药帕博西尼和匹莫齐特在体外实验中对于IgE介导的肥大细胞活化及脱颗粒的效应;2.探究临床用药帕博西尼和匹莫齐在被动皮肤过敏反应（PCA）和卵清蛋白（OVA）诱导的主动系统性过敏反应（ASA）体内模型中对于体内过敏反应的影响;3.通过免疫印迹技术检测肥大细胞活化过程中相关的信号分子的表达探究帕博西尼和匹莫齐特对于肥大细胞活化的作用机制。方法:1.通过使用抗二硝基苯酚（DNP）免疫球蛋白E（IgE）抗体致敏大鼠嗜碱性粒细胞（RBLs）和小鼠骨髓来源的肥大细胞（BMMCs）,用帕博西尼和匹莫齐特分别预处理细胞后用DNP-人血清白蛋白（HSA）抗原刺激,之后检测相关细胞介质的释放（组胺和β-氨基己糖苷酶）和肥大细胞活化表面标志物CD63的表达。2.肥大细胞的活化与其形态变化有关,通过甲苯胺蓝染色可以观察到肥大细胞的形态,而F-肌动蛋白作为阻止细胞活化期间颗粒进入质膜的屏障,F-肌动蛋白的重排允许颗粒内的内容物从细胞中分泌出来,通过鬼笔环肽染色然后在荧光显微镜下观察F-肌动蛋白的含量来区分肥大细胞的状态从而观察其脱颗粒的程度。3.鼠IgE介导的被动皮肤过敏反应（PCA）和卵清蛋白（OVA）诱导的主动系统性过敏反应（ASA）模型用于检测帕博西尼和匹莫齐特对体内过敏反应的影响。4.使用免疫印迹法检测与肥大细胞活化相关的信号分子的表达。结果:帕博西尼在100μM时与对照组相比其细胞活力没有显著性差异,表明帕博西尼在100μM时不影响肥大细胞的活性。帕博西尼以浓度依赖的方式抑制IgE介导的RBLs和BMMCs中β氨基己糖苷酶和组胺的释放,在40μM时显著抑制脱颗粒物质的释放（p<0.05,p<0.01,与DNP-HSA组比较）。流式细胞结果显示帕博西尼抑制了肥大细胞表面活化标记物CD63的上调（p<0.05,p<0.01,与DNP-HSA组比较）。甲苯胺蓝染色和鬼笔环肽染色的结果表明,帕博西尼抑制了肥大细胞中与活化相关的形态变化和丝状激动蛋白的重组,抑制了肥大细胞的脱颗粒。帕博西尼同样减弱了被动皮肤过敏反应（PCA）中小鼠的耳朵厚度的增加和伊文思蓝染料从反应部位的渗出（p<0.05,p<0.01,与DNP-HSA组比较）,并且在OVA诱导的主动系统性过敏反应中抑制了直肠温度降低的反应及炎症介质IL-4,IL-10的释放（p<0.01,与OVA刺激组比较）。免疫印迹结果显示帕博西尼抑制了与肥大细胞活化相关的分子p-Lyn和p-p38,p-JNK,p-ERK1/2的活化,之后通过检测β-氨基己糖苷酶释放率的结果表明在使用siRNA下调肥大细胞Lyn的表达或者使用ERK抑制剂U0126,JNK抑制剂SP600125和p38抑制剂SB203580之后不会影响帕博西尼对于肥大细胞活化的抑制作用。匹莫齐特在浓度最高为100μM时对于RBLs和BMMCs的活性与PBS组没有显著性差异（p<0.05,与未处理组比较）。匹莫齐特以浓度依赖的方式抑制IgE介导的RBLs和BMMCs中β-氨基己糖苷酶的释放,在40μM时具有明显的抑制作用（p<0.05,p<0.01,与DNP-HSA组比较）。甲苯胺蓝染色和鬼笔环肽染色的结果表明,匹莫齐特抑制了肥大细胞的脱颗粒及形态变化和丝状肌动蛋白的重组。匹莫齐特也同样减弱了被动皮肤过敏反应（PCA）中小鼠的耳朵的增厚和伊文思蓝染料的渗出（p<0.05,p<0.01,与DNPHSA组比较）;在OVA诱导的主动系统性过敏反应中匹莫齐特以20mg/kg的浓度作用于小鼠时,抑制了小鼠直肠温度降低的反应及血清中组胺的释放,同时流式细胞结果显示脾细胞中肥大细胞的数量减少（p<0.05,与OVA刺激组比较）。免疫印迹结果显示匹莫齐特抑制了SYK及MAPK信号通路中p38,JNK,ERK1/2的磷酸化。同时匹莫齐特以剂量依赖的方式抑制了IgE/Ag介导的肥大细胞的迁移（p<0.05,与DNP-HSA组比较）。结论:临床用药帕博西尼和匹莫齐特可以在体内外抑制IgE介导的肥大细胞活化,表明它们可能通过抑制肥大细胞脱颗粒而发展成为肥大细胞介导的过敏性疾病的治疗候选药物,从而用于过敏性疾病的治疗。