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目的:免疫组织化学法检测病理性瘢痕和周围正常皮肤组织中成纤维细胞CD90表达情况;采用组织块法原代培养建立病理性瘢痕成纤维细胞模型;使用免疫细胞化学法、免疫荧光双标记法结合激光扫描共聚焦显微镜,检测体外培养的病理性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中CD90表达情况,并分析CD90表达和成纤维细胞增殖、合成、收缩等功能的相关性。方法:1.取手术切除的瘢痕疙瘩4例、增生性瘢痕12例、正常皮肤(瘢痕边缘)16例标本,组织切片HE染色进一步证实临床诊断后,分为瘢痕疙瘩组、瘢痕疙瘩周围正常皮肤组、增生性瘢痕组、增生性瘢痕周围正常皮肤组。2.免疫组织化学SABC法检测不同组别中成纤维细胞的CD90表达情况。3.每组标本中选取特异性较强的组织块各三例,原代培养这四种不同组织来源的成纤维细胞,通过观察细胞形态和增殖周期,检测体外培养的三种成纤维细胞生长活性差异。4.经过3次传代、自然纯化后得到性质稳定的成纤维细胞,冻存后复苏传1-3代,制成细胞爬片,免疫细胞化学SABC法染色检测CD90的表达情况。5.间接法免疫荧光双重标记(CD90和Ⅰ型胶原蛋白、CD90和Ki-67、CD90和α-SMA)每株细胞,激光共聚焦显微镜下观测细胞并摄像后,通过计算每系成纤维细胞CD90、Ⅰ型胶原蛋白、α-SMA的荧光值和Ki-67阳性细胞百分比,检测成纤维细胞中四种蛋白的表达情况。6.统计分析CD90表达与其他3种蛋白表达的相关性。7.共聚焦多通道、多层次扫描单个成纤维细胞,分析CD90和α-SMA表达的关系。结果:1.免疫组织化学染色显示4例瘢痕疙瘩组织及其周围正常皮肤中未发现CD90阳性成纤维细胞,而12例增生性瘢痕组织中7例有较多肥大的CD90阳性成纤维细胞,增生性瘢痕周围正常皮肤中也有少量体积较小的CD90阳性细胞。2.组织块法原代培养建立了性状稳定的病理性瘢痕成纤维细胞模型。3.免疫细胞化学染色显示体外培养不同组织来源的细胞株均表达CD90。4.免疫荧光双重标记结合共聚焦扫描荧光定量发现增生性瘢痕来源成纤维细胞的CD90表达强于正常皮肤的(P<0.05),瘢痕疙瘩来源成纤维细胞的CD90表达和正常皮肤的表达无差异(P>0.05)。4.统计学分析未发现体外培养的各组成纤维细胞CD90表达和α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白、Ki-67具有相关性。5.单细胞共聚焦扫描发现CD90和α-SMA具有共区域表达和表达趋势较一致的特点。结论:1.增生性瘢痕中,CD90表达阳性的成纤维细胞可能是瘢痕增生的特异表型。2.组织块法原代培养可以建立病理性瘢痕成纤维细胞的体外模型。3.增生性瘢痕来源的成纤维细胞存在CD90多量表达的特异表型。4.单个瘢痕成纤维细胞CD90和α-SMA有共区域表达的特点和一致的表达趋势,二者可能有一定的协同关系。