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研究目的:设计并构建一种集靶向、热化疗、生物治疗于一体的纳米脂质体载药系统FA-Lip(GNRs-ODNs/DEX),并对其体内外抗类风湿性关节炎效果进行评价。研究方法:采用经典的种子生长法制备金纳米棒(GNRs),然后通过静电吸附作用将GNRs与NF-κB dODNs结合制备GNRs-ODNs,并通过琼脂糖凝胶电泳和透射电子显微镜对其进行表征。以脂质体(Lips)为药物载体,通过薄膜分散法制备装载有地塞米松(DEX)和GNRs-ODNs的FA-Lip(GNRs-ODNs/DEX)载药系统,分别使用HPLC和ICP-MS测定脂质体中DEX和GNRs的含量,并对载体在808 nm激光照射下的升温效果进行考察,最后使用激光纳米粒度仪对终制剂的粒径和电位进行分析,并通过透射电子显微镜对其形态进行考察。制剂制备成功后,以RAW264.7小鼠单核巨噬细胞为模型,通过CCK-8法检测制剂的细胞毒性,对其体外安全性进行评价;用LPS刺激细胞建立炎症细胞模型进行体外抗炎研究,通过ELISA试剂盒检测细胞上清液中炎症因子TNF-α和IL-6的含量,并采用NO检测试剂盒检测细胞上清液中NO的含量对载体的体外抗炎活性进行评价;分别使用电子荧光显微镜和流式细胞仪考察炎症细胞对药物的定性摄取和定量摄取。采用皮下注射完全弗氏佐剂的方法建立关节炎小鼠模型。以尾静脉注射的方式给药,给药期间,每两天对小鼠的体重、足跖厚度进行测量并对小鼠进行关节炎指数评分;给药结束后,用ELISA试剂盒对小鼠血液中炎症因子TNF-α和IL-6的含量进行检测,并截取小鼠后肢制备病理组织切片对其体内抗炎活性进行评价。最后通过活体成像技术对载体在小鼠体内的分布情况进行考察。研究结果:制备出GNRs后,通过静电吸附作用将其与NF-κB dODNs结合制备GNRs-ODNs,通过琼脂糖凝胶电泳证明了 ODNs与GNRs的结合,并通过透射电子显微镜观察到与ODNs结合后,GNRs的外貌特性并未发生改变,且分散性良好。经一系列处方和工艺优化后,合成了具有合适粒径和电位的FA-Lip(GNRs-ODNs/DEX),其平均粒径为 82.00±0.99nm,平均 PDI 为 0.249±0.004,平均电位为-20.83±0.23 mV,DEX的载药量和包封率分别为5.56±0.08%和97.87±0.07%,GNRs 的浓度和包封率分别为 82.42±0.05 pM 和 35.63±1.95%,且体外升温实验结果表明其具有良好的升温效果。经透射电子显微镜观察到其形貌为圆球状,分布均匀,粒径大小基本都在目标范围内。在细胞实验中,通过CCK-8法检测到FA-Lip(GNRs-ODNs/DEX)对细胞的毒副作用较小,且能明显降低DEX的细胞毒性;细胞摄取实验表明,FA-Lip(GNRs-ODNs/DEX)能快速高效的被炎症细胞摄取,且通过对细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-6和NO的检测,观察到与其他组相比,在808 nm激光照射下,FA-Lip(GNRs-ODNs/DEX)能更明显的抑制炎症细胞对炎症因子TNF-α IL-6和NO的分泌,具有良好的体外抗炎活性。在动物实验中,与其他组相比,FA-Lip(GNRs-ODNs/DEX)对炎症小鼠体重影响较小,尤其能明显改善糖皮质激素类药物DEX使小鼠体重快速降低的情况,毒副作用较小;且能更大幅度的降低炎症小鼠的足跖厚度、关节炎指数以及血清中炎症因子TNF-α IL-6的含量;组织病理切片表明,FA-Lip(GNRs-ODNs/DEX)组小鼠关节腔中炎症细胞较少浸润,软骨表面清晰平滑,与Blank组健康小鼠关节状态最为接近。活体成像实验表明FA-Lip(GNRs-ODNs/DEX)主要集中在小鼠炎症关节部位,具有炎症关节靶向且在48 h时仍未被完全代谢,在炎症关节累积时间较长,从而能发挥更好的体内抗炎效果。结论:本实验设计的FA-Lip(GNRs-ODNs/DEX)纳米给药系统集糖皮质激素类药物DEX、核酸药物ODNs和经808 nm激光照射能发挥热疗作用的金纳米棒于一体,具有良好的体内外抗炎活性,达到了靶向-热化疗-生物治疗联合治疗类风湿性关节炎的效果。