【摘 要】
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胰腺转录因子1a(pancreatic transcription factor 1a,Ptf1a)编码一种碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,b HLH)蛋白,在脊椎动物的中枢神经系统和胰腺中特异性表达,在
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胰腺转录因子1a(pancreatic transcription factor 1a,Ptf1a)编码一种碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,b HLH)蛋白,在脊椎动物的中枢神经系统和胰腺中特异性表达,在神经元亚型的分化,胰腺多能祖细胞的命运决定以及成体外分泌胰腺的维持中都起着重要作用,但目前关于其调控神经及胰腺早期发育的下游靶点还知之甚少。本研究对CRISPR/Cas9技术构建的热带爪蛙ptf1a-KI-3×HA-Td-tomato品系进行了传代和鉴定,在F2代获得了健康的纯合敲进个体。通过观察报告基因Td-tomato的红色荧光发现,Ptf1a在热带爪蛙视网膜、后脑及胰腺的表达均晚于已报道的m RNA信号,结合q RT-PCR和Western blot分析发现Ptf1a在早期胚胎发育期间的表达水平呈上升趋势。基于热带爪蛙34期ptf1a敲除整体胚胎的转录组测序分析及已发表文献,本研究在差异表达基因中筛选到7个与神经发育相关的基因:purb,dvl2,nect1,psen2,purne2,slc4a3,slc6a1。对34期和43期ptf1a敲除整体胚胎的转录组测序分析提示,该时期Ptf1a可能通过MAPK,ERb B,GNRH和PPAR等信号通路调控多基因的表达。本文以ptf1a-KI-3×HA-Td-tomato 43期蝌蚪的胰腺组织分离后,利用HA标签的抗体进行了染色质免疫共沉淀和高通量测序。基于对Ch IP-seq富集基因的GO分析和KEGG分析结果,本文筛选到了7个与胰腺发育相关的基因:selenot,hk2,prx,zfp36l2,mapk10,slc30a8,hes1。总之,本研究在蛋白水平揭示了Ptf1a的表达变化,已获得的ptf1a-KI-3×HATd-tomato热带爪蛙品系能够用于后续对Ptf1a的功能分析,筛选到的差异表达基因和Ch IP-seq富集基因也为进一步研究Ptf1a调控中枢神经系统及胰腺的发育机制奠定了基础。
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