神经损伤性勃起功能障碍治疗的临床与基础研究

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研究目的:(1)通过对前列腺癌根治患者术前进行性功能评估,术后早期使用磷酸二酯酶5抑制剂(phosphodiesterase type 5 inhibitor,PDE-5i)和阴茎负压吸引泵(vacuum erectile devices,VED)治疗,并进行12个月随访,评估阴茎康复方法对改善前列腺癌根治患者性功能的有效性和安全性。(2)通过构建神经损伤勃起功能障碍(cavernous nerve injury erectile dysfunction,CNI-ED)的大鼠动物模型,评估双羟基功能化聚乙二醇(Dihydroxy functionalized polyethylene glycol,DF-PEG)和乙二醇壳聚糖(glyco-chitosan,GCS)水凝胶(Hydrogel)包裹大鼠脂肪来源间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ASCs)分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)、单纯ASCEVs用于改善CNI-ED大鼠勃起功能的效果。研究内容:(1)临床研究拟纳入100例接受前列腺癌根治手术的术后患者,共分4个组。每组纳入患者25例,每组干预从前列腺癌根治术后第5周开始,治疗干预和观察12个月。分别予以每日服用他达拉非5mg、每日应用负压吸引装置15分钟、每日服用他达拉非5mg联合应用负压吸引装置及对照观察不予干预。(2)将大鼠ASCs-EVs复合在可注射DF-PEG/GCS水凝胶缓慢释放体系中,进行阴茎海绵体注射治疗CNI-ED,与单纯注射ASC-EVs进行比较,通过形态学、组织学和功能学方面评价ASCs-EVs在促进阴茎海绵体组织血管再生、神经化修复、促进平滑肌再生的作用。研究方法:(1)临床研究拟纳入100例患者,随机分为4组。具体分组如下:T组(每天服用他达拉非Tadalafil 5mg),V组(每天应用负压吸引装置15分钟),T+V组(每天服用他达拉非Tadalafil 5mg+应用负压吸引装置15分钟)和C组(对照组,不予药物和器械干预)。研究和评估阴茎康复治疗后6个月和12个月,患者勃起功能恢复状况(包括IIEF-5评分、未勃起状态下阴茎长度和自主完成性生活的能力)和严重的不良事件等。(2)从大鼠腹壁脂肪组织中获取ASCs,体外培养扩增后进一步分离ASCs来源EVs。用DF-PEG/GCS水凝胶支架包裹EVs后进行海绵体内注射,并与单纯ASCs-EVs进行大鼠海绵体注射比较。小动物活体成像观察ASCs-EVs复合水凝胶支架后的定点缓释作用。12周后,检测大鼠阴茎海绵体内压(intracavernous pressure,ICP)与平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)及其比值。通过Masson染色,检测大鼠海绵体平滑肌和胶原比例,使用免疫荧光染色检测v WF评估血管生成情况。观察ASCs-EVs复合支架对大鼠勃起功能的恢复情况及血管、神经和平滑肌再生修复情况。研究结果:(1)他达拉非每日5mg口服结合阴茎负压泵治疗,有助于前列腺癌根治术后IIEF5评分的改善。在治疗6个月和12个月后,比较单独使用他达拉非或单独使用阴茎负压泵的治疗效果,两者对IIEF5的改善效果无明显差异。在治疗12个月后,单独使用阴茎负压泵治疗相比对照组,其IIEF5评分有显著性提高。在治疗6个月和12个月后,C组和T组在阴茎长度对比上无统计学差异,即单纯他达拉非口服治疗不能改善阴茎长度的缩短。而单独阴茎负压泵治疗和阴茎负压泵联合他达拉非治疗,可以防止阴茎缩短,有利于术后阴茎长度的保持。在治疗12个月后,四组间自主完成性生活比例无统计学差异,且任何两组之间均无统计学差异。(2)研究结果证明ASCs-EVs可以改善CNI-ED大鼠的勃起功能,小动物活体成像的结果提示DF-PEG/GCS水凝胶能将ASCsEVs包裹后阴茎海绵体局部定点缓释,可以进一步改善勃起功能。而Western Blot、PCR和免疫荧光等结果显示ASCs-EVs可以促进阴茎海绵体血管、神经和平滑肌修复,DF-PEG/GCS水凝胶缓释支架材料能使ASCs-EVs更好地发挥上述作用。研究结论:(1)他达拉非每天5mg口服联合阴茎负压泵治疗,有助于前列腺癌根治术后IIEF5评分的改善;阴茎负压泵单独或者联合他达拉非治疗,有利于术后阴茎长度的保持;前列腺癌根治术后阴茎康复治疗12个月后,他达拉非、阴茎负压泵或者两者联合治疗与对照组相比,对自主勃起功能恢复(IIEF-5≥17分)无统计学差异的改变,四组都无法自主完成性生活。(2)包裹ASCsEVs的DF-PEG/GCS水凝胶支架可以促进阴茎海绵体血管、神经和平滑肌修复,水凝胶缓释支架可以使ASCs-EVs在大鼠阴茎海绵体组织内长期停留并定点缓释,持续促进大鼠海绵体组织的血管、神经和平滑肌再生。
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