目的:构建1.3倍乙肝病毒（HBV）B2、B3、C1、C2、I1亚型全基因真核表达载体瞬时转染细胞模型,观察HBV抗原表达情况及转染不同HBV基因亚型后对细胞周期的影响;利用Cas9/g RNA双表达载体系统,筛选出针对不同HBV亚型的最适靶标序列或序列组合。方法:将1.3倍乙肝病毒（HBV）B2、B3、C2亚型全基因真核表达载体瞬时转染不同背景的五株肝（癌）细胞系,收集24、48、72、96、120和144小时上清,通过ELISA检测其HBs Ag表达;用流式细胞仪检测B2、B3、C1、C2、I1亚型全基因真核表达载体转染不同背景的五株肝（癌）细胞系后细胞周期分布;将含有针对HBV保守区的12条靶序列的Cas9/g RNA双表达载体分别转染到Hep G2.2.15细胞中,研究其对HBV病毒基因的敲除作用。结果:1.3倍乙肝病毒（HBV）B2、B3、C1、C2、I1亚型全基因真核表达载体瞬时转染不同背景的五株肝（癌）细胞后,上清中可以检测到HBs Ag表达,且HBs Ag表达呈时序及表达强度的不同;分别转染不同HBV基因亚型至不同肝（癌）细胞后,细胞G1期、S期及G2期细胞所占百分数有不同程度的改变;转染不同sg RNAs/Cas9系统对HBV病毒具有清除效果。结论:成功构建了1.3倍B2、B3、C1、C2、I1亚型HBV全基因真核表达载体及瞬时细胞转染模型;不同HBV基因亚型转染细胞后对细胞周期具有一定影响,但其影响机制仍需进一步探讨;筛选出最适靶标序列组合sg HBV SP2/S2/Enh I/Cas9共表达载体,其对HBV病毒具有敲除作用。