防御素(defensin)是生物体先天性免疫系统中的一类短肽,是内源性抗菌肽中的一个大家族。防御素具有广谱的抗菌活性,无论在细胞内或细胞外都可以直接杀死细菌、真菌、病毒等病原微生物,维持机体内环境的稳定,同时对某些恶性肿瘤细胞也有毒杀作用。β-防御素是防御素家族的重要成员之一,本文对驯鹿β-防御素的表达、分离纯化及抗菌活性等方面展开了初步研究。本试验旨在构建驯鹿β防御素-1(reindeerβ-defensin -1,reBD-1)基因的原核表达载体pET-32a(+)/reBD-1,诱导reBD-1融合蛋白在大肠杆菌中表达,并对其表达产物的生物学活性进行评价。利用RT-PCR技术扩增出编码reBD-1前原肽基因。从重组克隆载体pMD-19T/reBD-1中扩增reBD-1成熟肽编码序列,并克隆入pET-32a(+)中,在大肠杆菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达reBD-1融合蛋白。表达的融合蛋白扩大培养,进一步纯化后进行体外抑菌实验。结果表明,编码reBD-1前原肽和成熟肽的基因序列大小分别为225bp和138bp,目的基因的序列与reBD-1 mRNA序列同源性为100﹪。前原肽和成熟肽融合蛋白分子量分别为28KDa和24KDa。利用琼脂糖扩散法表明0.08 mg /ml的纯化成熟肽蛋白对金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的活性有明显抵抗作用。结果显示,reBD-1前原肽及成熟肽的融合蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达。成熟肽融合蛋白对革兰氏阳性菌、阴性菌的活性有抗性,前原肽融合蛋白没有抗菌活性。