神经生长因子cDNA在毕赤酵母中的克隆表达、活性测定

来源 :大连医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:luhaixiong1971
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  本文用基因工程的方法,获得蛇毒神经生长因子cDNA的酵母表达系统,为此做了以下工作:设计合成一对特异引物,分别带有SnaBⅠ和NotⅠ的限制性内切酶的识别位点,以pPIC9K-NGF(带有组氨酸标签)重组质粒为模板,用PCR方法扩增NGFcDNA片段。这样NGFcDNA的两侧就带有SnaBⅠ和NotⅠ的识别位点。用限制性内切酶SnaBⅠ和NotⅠ酶切NGFcDNA的PCR产物,将其插入到载体pPIC9K中相应的限制性内切酶位点,构建表达载体pPIC9K-NGF。将重组质粒pPIC9K-NGF转化入大肠杆菌DH5α中,经PCR鉴定阳性转化子。以双脱氧末端终止法对克隆的NGFcDNA进行测序。 本文成功构建了表达重组质粒pPIC9K-NGF,pPIC9K-NGF成功转染毕赤酵母细胞GS115,pPIC9K-NGF目的蛋白在毕赤酵母中获得表达,分子量约为14KD,与预计理论值相符合,体外活性测定表明:蛇毒神经生长因子能促进DRG的生长。
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