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脂肪是机体储存能量的主要形式,因此作为储存脂肪的细胞器,脂滴在维持能量平衡和代谢稳态中起着核心作用。脂滴是个非常保守且高度动态的细胞器,不仅不同类型细胞中的脂滴大小变化非常大(从小于0.4μm到大于100μm),甚至同一种细胞的脂滴在不同生理条件下大小也会有很大的变化。脂滴大小的动态调节对于维持其正常功能十分重要。虽然前人针对脂滴大小的调控机制进行了大量的研究,发现了很多调控脂滴大小的因子,但是这些调控因子是如何被调控的仍有待于进一步研究。 为了探索脂滴大小的调控机制,在果蝇三龄幼虫的脂肪体中开展了一个基因过表达筛选。结合筛选结果和后期的表型分析发现,mrt过表达会导致脂肪细胞中出现巨大的脂滴,而mrt敲降或者移码突变则会导致脂肪细胞中脂滴变小。与此同时,脂质组学分析结果表明,mrt过表达会导致脂肪体的甘油三酯(TAG)和甘油二酯(DAG)的含量显著上升,磷脂酰胆碱(PC)含量显著降低。mrt最早是在筛选影响果蝇学习记忆能力的相关基因时被发现的,但对于其具体的生物学功能还几乎未被研究(Dubnau et al.,2003)。MRT蛋白含有一个高度保守的Myb/SANT-like DNA结合结构域,免疫染色结果显示MRT主要定位在细胞核中。为了进一步研究mrt调控脂滴大小的分子机制,利用Co-IP和蛋白质谱技术分析筛选与MRT互作的核蛋白。在蛋白质谱的基础上,运用遗传学,生物化学等手段发现,MRT与转录因子PZG以及NURF染色质重塑复合物中的NURF55亚基有直接的相互作用。并且MRT调控脂滴大小的功能依赖于PZG以及NURF复合物中的NURF301和NURF55亚基。通过qRT-PCR和遗传分析寻找MRT下游目的基因发现,脂滴表面蛋白Perilipin1是MRT发挥脂滴大小调控功能的主要下游基因之一。ChIP-qPCR的实验结果暗示MRT可能是通过结合在plin1的启动子区域直接抑制plin1的转录。脂滴体外融合实验表明,mrt过表达或者plin1的功能缺失能够显著增加脂滴在体外的融合频率。 为进一步研究染色质重塑在脂滴大小调控中的作用,在果蝇三龄幼虫脂肪体中对染色质重塑因子进行了系统的RNAi筛选。通过筛选,发现了一系列参与脂滴大小调控的染色质重塑因子。进一步的表型分析结果显示,单独敲降Brm染色质重塑复合物中的多个亚基会明显影响脂肪细胞中脂滴的大小。 本文深入研究了MRT调控脂滴大小的分子机制,发现了一个plin1转录调控的新机制,揭示了染色质重塑因子在脂滴大小调控中的重要功能,并且为后续染色质重塑因子调控脂滴大小的具体机制研究奠定了基础。